Изобретения

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к рекомбинантной продукции белков человека, и может быть использовано для получения гибридного рекомбинантного эритропоэтина человека. Конструируют нуклеотидные последовательности, кодирующие гибридные белки EPO-TR 1,6, EPO-TR 4 и EPO-TR 6. Белок ЕРО-TR 1,6 представляет собой рекомбинантный эритропоэтин человека, слитый с фрагментом TR 1,6 белка MUC1 человека. Белок EPO-TR 4 представляет собой рекомбинантный эритропоэтин человека, слитый с фрагментом TR 4 белка MUC1 человека. Гибридный белок EPO-TR 6 представляет собой рекомбинантный эритропоэтин человека, слитый с фрагментом TR 6 белка MUC1 человека. Гибридные белки получают путем роллерного культивирования в подходящих условиях модифицированной линии клеток млекопитающих СНО, содержащей кодирующую белок нуклеотидную последовательность с последующим выделением гибридного белка из культуральной жидкости. Изобретение позволяет получить гибридный рекомбинантный эритропоэтин человека, обладающий пролонгированным действием. 1. Гибридный белок ЕРО-TR 1,6 на основе рекомбинантного эритропоэтина человека, обладающий пролонгированным действием, соответствующий аминокислотной последовательности SEQ ID NO4 и представляющий собой рекомбинантный эритропоэтин человека, слитый с фрагментом TR 1,6 белка MUC1 человека. 2. Гибридный белок EPO-TR 4 на основе рекомбинантного эритропоэтина человека, обладающий пролонгированным действием, соответствующий аминокислотной последовательности SEQ ID NO5 и представляющий собой рекомбинантный эритропоэтин человека, слитый с фрагментом TR 4 белка MUC1 человека. 3. Гибридный белок EPO-TR 6 на основе рекомбинантного эритропоэтина человека, обладающий пролонгированным действием, соответствующий аминокислотной последовательности SEQ ID NO6 и представляющий собой рекомбинантный эритропоэтин человека, слитый с фрагментом TR 6 белка MUC1 человека. 4. Способ получения гибридного белка по п.п.1 или 2 или 3 путем роллерного культивирования в подходящих условиях модифицированной линии клеток млекопитающих СНО, содержащей кодирующую этот белок нуклеотидную последовательность SEQ ID NO1 или SEQ ID NO2 или SEQ ID NO3 с последующим выделением гибридного белка из культуральной жидкости.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и касается вариантов фосфолипазы А2 для экспрессии в дрожжах. Предложен вариант фосфолипазы А2, структурный ген которой кодирует белок, включающий аминокислотную последовательность фосфолипазы А2 штамма А-2688 Streptomyces violaceoruber, содержащую замену С-концевого дипептида FG, состоящего из аминокислотных остатков фенилаланина и глицина, на дипептид YG, состоящий из аминокислотных остатков тирозина и глицина, и содержащую на N-конце дополнительный дипептид SG, состоящий из аминокислотных остатков серина и глицина. Также предложена фосфолипаза А2, структурный ген которой кодирует белок, включающий аминокислотную последовательность фосфолипазы А2 штамма А-2688 Streptomyces violaceoruber или ее вариант, не содержащий сайтов N-гликозилирования, имеющую на N-конце дополнительный дипептид SG, состоящий из аминокислотных остатков серина и глицина, включающую С-концевой дипептид FG, состоящий из аминокислотных остатков фенилаланина и глицина, и дополнительно С-концевой полипептид, имеющий последовательность SEQ ID N:3. Изобретение обеспечивает получение высокоактивных фосфолипаз А2, способных к эффективной экспрессии в дрожжах. 1. Фосфолипаза А2 для экспрессии в дрожжах, структурный ген которой кодирует белок, включающий аминокислотную последовательность фосфолипазы А2 штамма А-2688 Streptomyces violaceoruber, содержащую замену С-концевого дипептида FG, состоящего из аминокислотных остатков фенилаланина и глицина, на дипептид YG, состоящий из аминокислотных остатков тирозина и глицина, и содержащую на N-конце дополнительный дипептид SG, состоящий из аминокислотных остатков серина и глицина. 2. Фосфолипаза А2 для экспрессии в дрожжах, структурный ген которой кодирует белок, включающий аминокислотную последовательность фосфолипазы А2 штамма А-2688 Streptomyces violaceoruber или ее вариант, не содержащий сайтов N-гликозилирования, имеющую на N-конце дополнительный дипептид SG, состоящий из аминокислотных остатков серина и глицина, включающую С-концевой дипептид FG, состоящий из аминокислотных остатков фенилаланина и глицина, и дополнительно С-концевой полипептид, имеющий последовательность SEQ ID N:3.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к фармацевтической композиции для лечения глазных инфекций, вызванных метициллин-устойчивыми штаммами Staphylococcus aureus, включающей в качестве активного начала N-концевой СНАР-домен эндолизина бактериофага K Staphylococcus aureus. Заявляемая фармацевтическая композиция не токсична и более эффективна, чем антибиотик ванкомицин и расширяет арсенал средств для лечения глазных инфекций, вызванных метициллин-устойчивыми штаммами Staphylococcus aureus. Фармацевтическая композиция для лечения глазных инфекций, вызванных метициллин-устойчивыми штаммами Staphylococcus aureus, включающая в качестве активного начала N-концевой СНАР-домен эндолизина бактериофага K Staphylococcus aureus, при следующем соотношении компонентов в лиофилизованной смеси, мас.% на сухой вес: N-концевой СНАР-домен эндолизина Бактериофага K Staphylococcus aureus 1,9 гипромеллоза 7,5 декспантенол 5,1 натрия хлорид 33,0 бензалкония хлорид 0,6 повидон 30,3 лимонная кислота моногидрат 0,8 двузамещенный натрия фосфат 10,8

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и представляет способ получения сложных эфиров жирных кислот с использованием дрожжей, принадлежащих к роду Yarrowia, обладающих способностью внутриклеточно накапливать сложные эфиры жирных кислот в условиях лимита по азоту или фосфору при добавлении в среду культивирования спирта дополнительно к основному источнику углерода, характеризующихся отсутствием активности или сниженной активностью фермента глицерол-3-фосфат дегидрогеназы и экспрессией гена, кодирующего фермент неспецифичную СоА-зависимую ацилтрансферазу. Изобретение относится также к штамму дрожжей Yarrowia lipolytica ВКПМ Y-4042, способному внутриклеточно накапливать сложные эфиры жирных кислот. Изобретение позволяет эффективно получать сложные эфиры жирных кислот. 1. Дрожжи, принадлежащие к роду Yarrowia, обладающие способностью внутриклеточно накапливать сложные эфиры жирных кислот в условиях лимита по азоту или фосфору при добавлении в среду культивирования спирта дополнительно к основному источнику углерода, характеризующиеся отсутствием активности или сниженной активностью фермента глицерол-3-фосфат дегидрогеназы и экспрессией гена, кодирующего фермент неспецифичную СоА-зависимую ацилтрансферазу. 2. Дрожжи по п.1, отличающиеся тем, что активность фермента глицерол-3-фосфат дегидрогеназы отсутствует за счет инактивации гена YlGPD1 (YALI0B02948g). 3. Дрожжи по п.1, отличающиеся тем, что активность фермента глицерол-3-фосфат дегидрогеназы снижена за счет ослабления экспрессии гена YlGPD1 (YALI0B02948g). 4. Дрожжи по п.1, отличающиеся тем, что активность фермента глицерол-3-фосфат дегидрогеназы снижена за счет внесения изменений в нуклеотидную последовательность гена YlGPD1 (YALI0B02948g). 5. Дрожжи по п.1, отличающиеся тем, что в качестве неспецифичной СоА-зависимой ацилтрансферазы выбрана неспецифичная СоА-зависимая диацилглицерид ацилтрансфераза из грамотрицательных бактерий Acinetobacter baylyi WS/DGAT. 6. Дрожжи по п.1, отличающиеся тем, что указанными дрожжами являются дрожжи Yarrowia lipolytica. 7. Штамм дрожжей Yarrowia lipolytica ВКПМ Y-4042, способный внутриклеточно накапливать сложные эфиры жирных кислот. 8. Способ микробиологического синтеза сложных эфиров жирных кислот, включающий культивирование дрожжей по п.1 или 7 в жидкой питательной среде в условиях лимита по азоту или фосфору при добавлении в среду культивирования спирта дополнительно к основному источнику углерода.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к трансформанту дрожжей Komagataella kurtzmanii, продуцирующему ?-глюканазу. Предложенный трансформант дрожжей Komagataella kurtzmanii содержит ген, кодирующий эндо-?-1,3-1,4-глюканазу из Paenibacillus jamilae, или ген, кодирующий фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична аминокислотной последовательности эндо-?-1,3-1,4-глюканазы из Paenibacillus jamilae не менее, чем на 90%. Изобретение позволяет расширить арсенал рекомбинантных микроорганизмов, продуцирующих ?-глюканазу. Формула изобретения 1. Трансформант дрожжей Komagataella kurtzmanii, продуцирующий ?-глюканазу, содержащий ген, кодирующий эндо-?-1,3-1,4-глюканазу из Paenibacillus jamilae, или ген, кодирующий фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична аминокислотной последовательности эндо-?-1,3-1,4-глюканазы из Paenibacillus jamilae не менее чем на 90%. 2. Трансформант по п. 1, в котором в качестве фермента, аминокислотная последовательность которого гомологична эндо-?-1,3-1,4-глюканазе из Paenibacillus jamilae не менее чем на 90%, используют ?-глюканазу из Paenibacillus polymyxa, или ?-глюканазу из Paenibacillus terrae, или ?-глюканазу из Paenibacillus peoriae, или ?-глюканазу из Paenibacillus kribbensis.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложена бактерия вида Escherichia coli, обладающая способностью продуцировать L-треонин, отличающаяся тем, что в ней инактивирован ген yifK. Предложен способ микробиологического синтеза L-треонина с использованием указанной бактерии. Предложен штамм Escherichia coli ВКПМ В-13240 - продуцент треонина. Группа изобретений позволяет расширить арсенал бактерий вида Escherichia coli, способных к продукции L-треонина, и арсенал способов микробиологического синтеза L-треонина, а также позволяет увеличить продукцию L-треонина в указанном модифицированном микроорганизме по сравнению с контрольным родительским микроорганизмом. 1. Бактерия вида Escherichia coli, обладающая способностью продуцировать L-треонин, отличающаяся тем, что в ней инактивирован ген yifK. 2. Способ микробиологического синтеза L-треонина, включающий в себя выращивание бактерии вида Escherichia coli в подходящей питательной среде, отличающийся тем, что в качестве бактерии используют бактерию по п. 1. 3. Штамм Escherichia coli ВКПМ В-13240 - продуцент треонина.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложена бактерия Bacillus subtilis, продуцирующая 5?-аминоимидазол-4-карбоксамидрибозид (АИКАР). Указанная бактерия содержит дерегулированный pur-оперон на фоне инактивированного гена purH, модифицированные гетерологичные гены prs и purF E.coli под контролем сильного промотора PrpsF в составе хромосомы. При этом она обладает по крайней мере одной из следующих характеристик: содержит ген zwf под контролем сильного промотора PrpsF, содержит гетерологичный ген udhA под контролем сильного промотора PrpsF, содержит делецию гена sacB. Предложен также способ синтеза АИКАР путем культивирования в соответствующих условиях указанной бактерии. При этом культивирование осуществляют на среде следующего состава, мас. %: кормовые дрожжи 0,5-1,0, сахароза 10-13, изолят сои 2,5-3,5, кукурузный экстракт 3,0-5,0, мочевина 0,6-0,8, (??4)2??O4 0,8-1,6, пропинол 0,4-0,5, вода - остальное. Группа изобретений обеспечивает высокий уровень синтеза АИКАР до 20 г/л. 1. Бактерия Bacillus subtilis, продуцирующая 5?-аминоимидазол-4-карбоксамидрибозид, содержащая дерегулированный pur-оперон на фоне инактивированного гена purH, модифицированные гетерологичные гены prs и purF E.coli под контролем сильного промотора PrpsF в составе хромосомы, и отличающаяся по крайней мере одной из следующих характеристик: - содержит ген zwf под контролем сильного промотора PrpsF, - содержит гетерологичный ген udhA под контролем сильного промотора PrpsF, - содержит делецию гена sacB. 2. Бактерия по п. 1, представляющая собой штамм Bacillus subtilis АМ878, продуцирующий 5?-аминоимидазол-4-карбоксамидрибозид и полученный путем введения в хромосому штамма-реципиента Bacillus subtilis ВКПМ В-11156 гена zwf под контролем сильного промотора PrpsF. 3. Бактерия по п. 1, представляющая собой штамм Bacillus subtilis АМ890, продуцирующий 5?-аминоимидазол-4-карбоксамидрибозид и полученный путем введения в хромосому штамма-реципиента Bacillus subtilis АМ878 гетерологичного гена udhA E.coli под контролем сильного промотора PrpsF. 4. Бактерия по п. 1, представляющая собой штамм Bacillus subtilis АМ895, продуцирующий 5?-аминоимидазол-4-карбоксамидрибозид и полученный путем введения в хромосому штамма-реципиента Bacillus subtilis АМ890 делеции гена sacB. 5. Способ микробиологического синтеза пуринового нуклеозида 5?-аминоимидазол-4-карбоксамидрибозида путем культивирования в соответствующих условиях бактерии по п. 1 на среде следующего состава, мас. %: кормовые дрожжи 0.5-1.0 сахароза 10-13 изолят сои 2,5-3.5 кукурузный экстракт 3.0-5.0 мочевина 0.6-0.8 (??4)2??O4 0.8-1.6 пропинол 0.4-0.5 вода остальное

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Группа изобретений относится к медицине и касается антикоагулянтного лекарственного средства, представляющего собой синтетический дипептид Ac-Trp-Arg-Pip?HCl или его фармацевтически приемлемые соли. Группа изобретений также касается фармацевтической композиции, включающей в качестве действующего вещества указанное антикоагулянтное лекарственное средство и вспомогательные вещества - микрокристаллическую целлюлозу и стеариновую кислоту и/или ее фармацевтически приемлемую соль. Группа изобретений обеспечивает снижение риска неконтролируемого тромбообразования. 1. Антикоагулянтное лекарственное средство, представляющее собой синтетический дипептид Ac-Trp-Arg-Pip?HCl или его фармацевтически приемлемые соли. 2. Фармацевтическая композиция, включающая в качестве действующего вещества антикоагулянтное лекарственное средство по п. 1 и вспомогательные вещества: микрокристаллическую целлюлозу и стеариновую кислоту и/или ее фармацевтически приемлемую соль, при следующем соотношении компонентов, мас. %: - дипептид - 50,0 - стеариновая кислота и/или ее фармацевтически приемлимая соль - 1,0 - целлюлоза микрокристалическая - до 100,0. Увеличенное изображение (открывается в отдельном окне) 3. Фармацевтическая композиция по п. 2, отличающаяся тем, что в качестве соли стеариновой кислоты используют преимущественно магниевую соль. 4. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 2, 3, отличающаяся тем, что она выполнена в форме таблетки, капсулы, гранулы, саше. 5. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 2, 3, отличающаяся тем, что она выполнена в форме таблетки, покрытой кишечнорастворимой оболочкой. 6. Фармацевтическая композиция по п. 5, отличающаяся тем, что средняя масса ядра таблетки составляет 0,3 г. 7. Фармацевтическая композиция по пп. 5, 6, отличающаяся тем, что оболочка таблетки составляет до 10% от массы таблетки-ядра. 8. Фармацевтическая композиция по пп. 5-7, отличающаяся тем, что оболочка таблетки содержит кополимер метакриловой кислоты, кремния диоксид коллоидный безводный, натрия бикарбонат, натрия лаурилсульфат, тальк, титана диоксид, триэтил цитрат, приемлемые красители или готовую смесь для пленочного покрытия марки «Acryl-EZE® 93А White».

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Группа изобретений относится к микробиологии и биотехнологии и касается получения трансформантов дрожжей Schizosaccharomyces pombe, продуцирующих молочную кислоту. Предложен трансформант, несущий ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%. Также предложен трансформант, несущий ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%, в котором инактивирован или делетирован один или несколько генов, кодирующих ферменты, участвующие в пути биосинтеза этанола. Предложен трансформант, несущий ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus, или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%, и ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus plantarum или Lactobacillus pentosus. Предложен трансформант, несущий ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%, и ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus plantarum или Lactobacillus pentosus, в котором инактивирован или делетирован один или несколько генов, кодирующих ферменты, участвующие в пути биосинтеза этанола. Также предложены варианты способа получения указанных трансформантов и способ микробиологического синтеза молочной кислоты. Группа изобретений обеспечивает эффективную продукцию молочной кислоты при небольшой концентрации побочного продукта. 1. Трансформант дрожжей Schizosaccharomyces pombe, продуцирующий молочную кислоту, содержащий ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%. 2. Трансформант по п.1, в котором указанный ген ldh интегрирован в состав хромосомы. 3. Трансформант по п.1, в котором в качестве фермента, аминокислотная последовательность которого гомологична лактатдегидрогеназе из Lactobacillus acidophilus не менее чем на 93%, используют лактатдегидрогеназу из Lactobacillus kitasatonis, или Lactobacillus ultunensis, или Lactobacillus crispatus, или Lactobacillus gallinarum, или Lactobacillus amylovorus, или Lactobacillus kefiranofaciens. 4. Трансформант дрожжей Schizosaccharomyces pombe, продуцирующий молочную кислоту, содержащий ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%, в котором инактивирован или делетирован один или несколько генов, кодирующих ферменты, участвующие в пути биосинтеза этанола. 5. Трансформант по п.4, в котором инактивирован ген adh1 и/или pdc2. 6. Трансформант дрожжей Schizosaccharomyces pombe, продуцирующий молочную кислоту, содержащий ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%, и ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus plantarum или Lactobacillus pentosus. 7. Трансформант дрожжей Schizosaccharomyces pombe продуцирующий молочную кислоту, содержащий ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее, чем на 93%, и ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus plantarum или Lactobacillus pentosus, в котором инактивирован или делетирован один или несколько генов, кодирующих ферменты, участвующие в пути биосинтеза этанола. 8. Трансформант по п.7, в котором инактивирован ген adh1 и/или pdc2. 9. Способ получения трансформанта по п.1, включающий введение в клетки дрожжей Schizosaccharomyces pombe гена ldh, кодирующего лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%. 10. Способ получения трансформанта по п.4, включающий введение в клетки дрожжей Schizosaccharomyces pombe гена ldh, кодирующего лактатдегидрогеназу, из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%, и инактивацию или делетирование одного или нескольких генов, кодирующих ферменты, участвующие в пути биосинтеза этанола. 11. Способ получения трансформанта по п.6, включающий введение в клетки дрожжей Schizosaccharomyces pombe гена ldh, кодирующего лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%, и гена ldh, кодирующего лактатдегидрогеназу из Lactobacillus plantarum или Lactobacillus pentosus. 12. Способ получения трансформанта по п.7, включающий введение в клетки дрожжей Schizosaccharomyces pombe гена ldh, кодирующего лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%, гена ldh, кодирующего лактатдегидрогеназу из Lactobacillus plantarum или Lactobacillus pentosus, и инактивацию или делетирование одного или нескольких генов, кодирующих ферменты, участвующие в пути биосинтеза этанола. 13. Способ микробиологического синтеза молочной кислоты, включающий культивирование дрожжей Schizosaccharomyces pombe в питательной среде, отличающийся тем, что для культивирования используют трансформант по пп.1-8.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии, в частности к трансформанту дрожжей Pichia pastoris, продуцирующему ксиланазу и содержащему ген xyl, кодирующий эндо-1,4-?-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%. 1. Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий ксиланазу, содержащий ген xyl, кодирующий эндо-1,4-?-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%. 2. Трансформант по п. 1, в котором в качестве фермента, аминокислотная последовательность которого гомологична эндо-1,4-?-ксиланазе из Paenibacillus brasilensis не менее чем на 93%, используют эндо-1,4-?-ксиланазу из Paenibacillus polymyxa, или эндо-1,4-?-ксиланазу из Paenibacillus terrae, или эндо-1,4-?-ксиланазу из Paenibacillus peoriae, или эндо-1,4-?-ксиланазу из Paenibacillus jamilae.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)