Группа изобретений относится к микробиологии и биотехнологии и касается получения трансформантов дрожжей Schizosaccharomyces pombe, продуцирующих молочную кислоту. Предложен трансформант, несущий ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%. Также предложен трансформант, несущий ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%, в котором инактивирован или делетирован один или несколько генов, кодирующих ферменты, участвующие в пути биосинтеза этанола. Предложен трансформант, несущий ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus, или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%, и ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus plantarum или Lactobacillus pentosus. Предложен трансформант, несущий ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%, и ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus plantarum или Lactobacillus pentosus, в котором инактивирован или делетирован один или несколько генов, кодирующих ферменты, участвующие в пути биосинтеза этанола. Также предложены варианты способа получения указанных трансформантов и способ микробиологического синтеза молочной кислоты. Группа изобретений обеспечивает эффективную продукцию молочной кислоты при небольшой концентрации побочного продукта. 1. Трансформант дрожжей Schizosaccharomyces pombe, продуцирующий молочную кислоту, содержащий ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%.
2. Трансформант по п.1, в котором указанный ген ldh интегрирован в состав хромосомы.
3. Трансформант по п.1, в котором в качестве фермента, аминокислотная последовательность которого гомологична лактатдегидрогеназе из Lactobacillus acidophilus не менее чем на 93%, используют лактатдегидрогеназу из Lactobacillus kitasatonis, или Lactobacillus ultunensis, или Lactobacillus crispatus, или Lactobacillus gallinarum, или Lactobacillus amylovorus, или Lactobacillus kefiranofaciens.
4. Трансформант дрожжей Schizosaccharomyces pombe, продуцирующий молочную кислоту, содержащий ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%, в котором инактивирован или делетирован один или несколько генов, кодирующих ферменты, участвующие в пути биосинтеза этанола.
5. Трансформант по п.4, в котором инактивирован ген adh1 и/или pdc2.
6. Трансформант дрожжей Schizosaccharomyces pombe, продуцирующий молочную кислоту, содержащий ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%, и ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus plantarum или Lactobacillus pentosus.
7. Трансформант дрожжей Schizosaccharomyces pombe продуцирующий молочную кислоту, содержащий ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее, чем на 93%, и ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus plantarum или Lactobacillus pentosus, в котором инактивирован или делетирован один или несколько генов, кодирующих ферменты, участвующие в пути биосинтеза этанола.
8. Трансформант по п.7, в котором инактивирован ген adh1 и/или pdc2.
9. Способ получения трансформанта по п.1, включающий введение в клетки дрожжей Schizosaccharomyces pombe гена ldh, кодирующего лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%.
10. Способ получения трансформанта по п.4, включающий введение в клетки дрожжей Schizosaccharomyces pombe гена ldh, кодирующего лактатдегидрогеназу, из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%, и инактивацию или делетирование одного или нескольких генов, кодирующих ферменты, участвующие в пути биосинтеза этанола.
11. Способ получения трансформанта по п.6, включающий введение в клетки дрожжей Schizosaccharomyces pombe гена ldh, кодирующего лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%, и гена ldh, кодирующего лактатдегидрогеназу из Lactobacillus plantarum или Lactobacillus pentosus.
12. Способ получения трансформанта по п.7, включающий введение в клетки дрожжей Schizosaccharomyces pombe гена ldh, кодирующего лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%, гена ldh, кодирующего лактатдегидрогеназу из Lactobacillus plantarum или Lactobacillus pentosus, и инактивацию или делетирование одного или нескольких генов, кодирующих ферменты, участвующие в пути биосинтеза этанола.
13. Способ микробиологического синтеза молочной кислоты, включающий культивирование дрожжей Schizosaccharomyces pombe в питательной среде, отличающийся тем, что для культивирования используют трансформант по пп.1-8.
2. Трансформант по п.1, в котором указанный ген ldh интегрирован в состав хромосомы.
3. Трансформант по п.1, в котором в качестве фермента, аминокислотная последовательность которого гомологична лактатдегидрогеназе из Lactobacillus acidophilus не менее чем на 93%, используют лактатдегидрогеназу из Lactobacillus kitasatonis, или Lactobacillus ultunensis, или Lactobacillus crispatus, или Lactobacillus gallinarum, или Lactobacillus amylovorus, или Lactobacillus kefiranofaciens.
4. Трансформант дрожжей Schizosaccharomyces pombe, продуцирующий молочную кислоту, содержащий ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%, в котором инактивирован или делетирован один или несколько генов, кодирующих ферменты, участвующие в пути биосинтеза этанола.
5. Трансформант по п.4, в котором инактивирован ген adh1 и/или pdc2.
6. Трансформант дрожжей Schizosaccharomyces pombe, продуцирующий молочную кислоту, содержащий ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%, и ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus plantarum или Lactobacillus pentosus.
7. Трансформант дрожжей Schizosaccharomyces pombe продуцирующий молочную кислоту, содержащий ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее, чем на 93%, и ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus plantarum или Lactobacillus pentosus, в котором инактивирован или делетирован один или несколько генов, кодирующих ферменты, участвующие в пути биосинтеза этанола.
8. Трансформант по п.7, в котором инактивирован ген adh1 и/или pdc2.
9. Способ получения трансформанта по п.1, включающий введение в клетки дрожжей Schizosaccharomyces pombe гена ldh, кодирующего лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%.
10. Способ получения трансформанта по п.4, включающий введение в клетки дрожжей Schizosaccharomyces pombe гена ldh, кодирующего лактатдегидрогеназу, из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%, и инактивацию или делетирование одного или нескольких генов, кодирующих ферменты, участвующие в пути биосинтеза этанола.
11. Способ получения трансформанта по п.6, включающий введение в клетки дрожжей Schizosaccharomyces pombe гена ldh, кодирующего лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%, и гена ldh, кодирующего лактатдегидрогеназу из Lactobacillus plantarum или Lactobacillus pentosus.
12. Способ получения трансформанта по п.7, включающий введение в клетки дрожжей Schizosaccharomyces pombe гена ldh, кодирующего лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%, гена ldh, кодирующего лактатдегидрогеназу из Lactobacillus plantarum или Lactobacillus pentosus, и инактивацию или делетирование одного или нескольких генов, кодирующих ферменты, участвующие в пути биосинтеза этанола.
13. Способ микробиологического синтеза молочной кислоты, включающий культивирование дрожжей Schizosaccharomyces pombe в питательной среде, отличающийся тем, что для культивирования используют трансформант по пп.1-8.