Изобретения

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения гетерогенного биокатализатора на основе гидролазы эфиров альфа-аминокислот (AEH) из рекомбинантных бактерий Escherichia coli, несущих ген aehR из Xanthomonas rubrilineans. Для осуществления способа указанные рекомбинантные бактерии культивируют в подходящих условиях, затем разрушают клетки биомассы методом гомогенизации высокого давления для получения гомогената. После чего проводят иммобилизацию содержащейся в гомогенате гидролазы эфиров альфа-аминокислот путем формирования ферментных агрегатов под действием осадителя - сульфата аммония или полиэтиленгликоля - с последующей стадией сшивки этих агрегатов глутаровым альдегидом в присутствии водорастворимого производного аминополисахарида хитозана. Полученные гетерогенные биокатализаторы используют для ферментативного синтеза аминобета-лактамных антибиотиков, например цефалексина, цефпрозила, цефаклора, ампициллина, амоксициллина, путем ацилирования ключевых бета-лактамных соединений соответствующими производными эфира D-аминофенилуксусной кислоты. Настоящее изобретение позволяет получить гетерогенные биокатализаторы с повышенной синтетазной активностью. 1. Способ получения гетерогенного биокатализатора на основе гидролазы эфиров альфа-аминокислот из бактерий, несущих ген aehR из Xanthomonas rubrilineans, включающий получение биомассы штамма бактерий, содержащих ген aehR из Xanthomonas rubrilineans путем культивирования этого штамма в подходящих условиях, разрушения клеток биомассы для получения гомогената с последующей иммобилизацией содержащейся в гомогенате гидролазы эфиров альфа-аминокислот путем формирования ферментных агрегатов под действием осадителя и последующей поперечной сшивки этих агрегатов глутаровым альдегидом, отличающийся тем, что для получения биомассы используют рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli, несущий ген aehR из Xanthomonas rubrilineans; получение гомогената осуществляют путем разрушения клеток полученной биомассы методом гомогенизации высокого давления; формирование ферментных агрегатов непосредственно из полученного гомогената под действием осадителя: сульфата аммония или полиэтиленгликоля, а также последующую поперечную сшивку агрегатов глутаровым альдегидом проводят в присутствии водорастворимого производного аминополисахарида хитозана. 2. Гетерогенный биокатализатор на основе гидролазы эфиров альфа-аминокислот из бактерий, несущих ген aehR из Xanthomonas rubrilineans, полученный способом по п.1 из рекомбинантного штамма бактерий Escherichia coli ВКПМ В-11271. 3. Гетерогенный биокатализатор на основе гидролазы эфиров альфа-аминокислот из бактерий, несущих ген aehR из Xanthomonas rubrilineans, полученный способом по п.1 из рекомбинантного штамма бактерий Escherichia coli ВКПМ В-11246. 4. Способ синтеза аминобета-лактамного антибиотика путем ацилирования ключевого бета-лактамного соединения соответствующим производным эфира D-аминофенилуксусной кислоты, под действием гетерогенного биокатализатора на основе гидролазы эфиров альфа-аминокислот из бактерий, несущих ген aehR Xanthomonas rubrilineans, отличающийся тем, что для осуществления синтеза используют гетерогенный биокатализатор, полученный способом по п.1.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой трансформант дрожжей Komagataella kurtzmanii, продуцирующий эндо-?-1,3(4)-D-глюканазу из Bacillus pumilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 96%, а именно эндо-?-1,3(4)-D-глюканазу из Bacillus safensis, или Bacillus stratosphericus, или Bacillus altitudinis, или Bacillus aerius, или Bacillus cellulasensis, или Bacillus australimaris. Изобретение позволяет получать эндо-?-1,3(4)-D-глюканазу с высокой степенью эффективности. 1. Трансформант дрожжей Komagataella kurtzmanii, продуцирующий ?-глюканазу, содержащий ген bgl, кодирующий эндо-?-l,3(4)-D-глюканазу из Bacillus pumilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична эндо-?-l,3(4)-D-глюканазе из Bacillus pumilus не менее чем на 96%. 2. Трансформант по п. 1, в котором в качестве фермента, аминокислотная последовательность которого гомологична эндо-?-l,3(4)-D-глюканазе из Bacillus pumilus не менее чем на 96%, используют эндо-?-l,3(4)-D-глюканазу из Bacillus safensis, или эндо-?-l,3(4)-D-глюканазу из Bacillus stratosphericus, или эндо-?-l,3(4)-D-глюканазу из Bacillus altitudinis, или эндо-?-l,3(4)-D-глюканазу из Bacillus aerius, или эндо-?-l,3(4)-D-глюканазу из Bacillus cellulasensis, или эндо-?-l,3(4)-D-глюканазу из Bacillus australimaris.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и представляет способ получения сложных эфиров жирных кислот с использованием дрожжей, принадлежащих к роду Yarrowia, обладающих способностью внутриклеточно накапливать сложные эфиры жирных кислот в условиях лимита по азоту или фосфору при добавлении в среду культивирования спирта дополнительно к основному источнику углерода, характеризующихся отсутствием активности или сниженной активностью фермента глицерол-3-фосфат дегидрогеназы и экспрессией гена, кодирующего фермент неспецифичную СоА-зависимую ацилтрансферазу. Изобретение относится также к штамму дрожжей Yarrowia lipolytica ВКПМ Y-4042, способному внутриклеточно накапливать сложные эфиры жирных кислот. Изобретение позволяет эффективно получать сложные эфиры жирных кислот. 1. Дрожжи, принадлежащие к роду Yarrowia, обладающие способностью внутриклеточно накапливать сложные эфиры жирных кислот в условиях лимита по азоту или фосфору при добавлении в среду культивирования спирта дополнительно к основному источнику углерода, характеризующиеся отсутствием активности или сниженной активностью фермента глицерол-3-фосфат дегидрогеназы и экспрессией гена, кодирующего фермент неспецифичную СоА-зависимую ацилтрансферазу. 2. Дрожжи по п.1, отличающиеся тем, что активность фермента глицерол-3-фосфат дегидрогеназы отсутствует за счет инактивации гена YlGPD1 (YALI0B02948g). 3. Дрожжи по п.1, отличающиеся тем, что активность фермента глицерол-3-фосфат дегидрогеназы снижена за счет ослабления экспрессии гена YlGPD1 (YALI0B02948g). 4. Дрожжи по п.1, отличающиеся тем, что активность фермента глицерол-3-фосфат дегидрогеназы снижена за счет внесения изменений в нуклеотидную последовательность гена YlGPD1 (YALI0B02948g). 5. Дрожжи по п.1, отличающиеся тем, что в качестве неспецифичной СоА-зависимой ацилтрансферазы выбрана неспецифичная СоА-зависимая диацилглицерид ацилтрансфераза из грамотрицательных бактерий Acinetobacter baylyi WS/DGAT. 6. Дрожжи по п.1, отличающиеся тем, что указанными дрожжами являются дрожжи Yarrowia lipolytica. 7. Штамм дрожжей Yarrowia lipolytica ВКПМ Y-4042, способный внутриклеточно накапливать сложные эфиры жирных кислот. 8. Способ микробиологического синтеза сложных эфиров жирных кислот, включающий культивирование дрожжей по п.1 или 7 в жидкой питательной среде в условиях лимита по азоту или фосфору при добавлении в среду культивирования спирта дополнительно к основному источнику углерода.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способу получения упорядоченных пленок лизоцима на твердых подложках. Готовят маточный раствор лизоцима в буфере с концентрацией, соответствующей началу кристаллизации лизоцима. Фильтруют раствор лизоцима и центрифугируют. Параллельно готовят маточный раствор хлорида натрия - осадителя для лизоцима. Раствор осадителя фильтруют. Затем маточные растворы лизоцима и осадителя смешивают в объемном соотношении 1:1. Полученную смесь выдерживают в течение 1 ч для образования олигомеров. Далее смесь наносят на водную субфазу ленгмюровской ванны, формируют монослой и переносят сформированный монослой на твердую подложку. Изобретение позволяет получать более однородные и плотноупакованные пленки лизоцима толщиной 7,5 нм. 7 з.п. ф-лы, 4 ил., 3 табл., 1 пр.

Федеральное государственное учреждение "Федеральный научно-исследовательский центр "Кристаллография и фотоника" Российской академии наук (RU)

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к фармацевтической композиции для лечения глазных инфекций, вызванных метициллин-устойчивыми штаммами Staphylococcus aureus, включающей в качестве активного начала N-концевой СНАР-домен эндолизина бактериофага K Staphylococcus aureus. Заявляемая фармацевтическая композиция не токсична и более эффективна, чем антибиотик ванкомицин и расширяет арсенал средств для лечения глазных инфекций, вызванных метициллин-устойчивыми штаммами Staphylococcus aureus. Фармацевтическая композиция для лечения глазных инфекций, вызванных метициллин-устойчивыми штаммами Staphylococcus aureus, включающая в качестве активного начала N-концевой СНАР-домен эндолизина бактериофага K Staphylococcus aureus, при следующем соотношении компонентов в лиофилизованной смеси, мас.% на сухой вес: N-концевой СНАР-домен эндолизина Бактериофага K Staphylococcus aureus 1,9 гипромеллоза 7,5 декспантенол 5,1 натрия хлорид 33,0 бензалкония хлорид 0,6 повидон 30,3 лимонная кислота моногидрат 0,8 двузамещенный натрия фосфат 10,8

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к биотехнологии. Биологический препарат получен путем смешивания культуралъной жидкости бактерий Brevibacillus laterosporus ВКПМ В-10531 с гранулами вспученного перлитового песка в соотношении от 4:1 до 3:2 с последующим высушиванием. Разрушение планктонных и биопленочных форм микроскопических водорослей приводит к изменению их цвета, а в дальнейшем к обесцвечиванию. Изобретение позволяет повысить эффективность борьбы с микроскопическими водорослями в водной среде. 2 табл.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП ГосНИИгенетика) (RU), Колледж наук о жизни, Университет Сычуани (CN)

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен рекомбинантный штамм бактерий Rhodococcus rhodochrous ВКПМ Ас-2194, обладающий двумя типами акриламид-трансформирующей активности, а именно акриламид-гидролизующей и акриламид-трансферазной активностями. Также предложен способ получения смешанного раствора акрилата аммония и N-изопропилакриламида с использованием указанного штамма. Изобретение обеспечивает эффективное получение смешанного раствора акрилата аммония и N-изопропилакриламида. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл., 4 пр.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ извлечения липидов из микроводоросли рода Chlorella и дрожжей Yarrowia lipolytica для получения биодизельного топлива. Способ включает дополнение стадии культивирования микроводорослей Chlorella стадией культивирования дрожжей Yarrowia lipolytica W23. Липидную фракцию экстрагируют органическими растворителями хлороформ-метанол в соотношении 2:1-1:2 из биомассы микроводоросли и дрожжей, причем остаточную биомассу микроводоросли и остаточную биомассу дрожжей подвергают гидролизу при температуре 80-140°C в течение 20-90 минут и в виде водной суспензии используют в качестве питательной среды для выращивания дрожжей Yarrowia lipolytica W23. Изобретение обеспечивает получение высокого выхода липидов – до 37% по сухому весу. 1. Способ извлечения липидов из биомассы микроводоросли рода Chlorella и дрожжей Yarrowia lipolytica, заключающийся в том, что биомассу микроводоросли отделяют от культуральной среды, обрабатывают органическими растворителями для экстракции липидной фракции, а остаточную биомассу микроводоросли направляют на дальнейшую переработку, причем остаточную биомассу микроводоросли подвергают гидролизу и в виде водной суспензии используют в качестве питательной среды для выращивания дрожжей Yarrowia lipolytica W23, после чего биомассу дрожжей отделяют от культуральной среды и экстрагируют из нее липидную фракцию, а остаточную биомассу дрожжей подвергают гидролизу и направляют на стадию их выращивания. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют хлороформ-метанол в соотношении 2:1-1:2. 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что биомассу микроводоросли Chlorella подвергают гидролизу при 80-140°C 20-90 минут. 4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что остаточную биомассу дрожжей Yarrowia lipolytica W23 подвергают гидролизу при 80-140°C 20-90 минут. 5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют 5%-20% водную суспензию остаточной биомассы микроводоросли. 6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что количество остаточной биомассы дрожжей в питательной среде для их выращивания составляет 5-10%.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения дрожжей Komagataella kurtzmanii с улучшенной способностью к усвоению сорбитола, включающий трансформацию клеток дрожжей K. kurtzmanii рекомбинантной плазмидной ДНК pPH727-Sdh115, содержащей: фрагмент ДНК, кодирующий ген SOR1 (PAS_chr1-1_0490) дрожжей K. phaffii GS115, включающий последовательность структурного гена сорбитолдегидрогеназы дрожжей K. phaffii размером 1047 н.п. и нативную 3'-UTR (3'-нетранслируемую область) длиной 211 н.п., определяемую как промотор гена SOR1, терминаторную область гена алкогольоксидазы АОХ1 дрожжей K. kurtzmanii, ген HIS4 дрожжей K. kurtzmanii, фрагменты дистальной части промоторной области гена алкогольоксидазы АОХ1 дрожжей K. kurtzmanii, фрагмент ДНК плазмиды pUC18, ген устойчивости ApR, обеспечивающий селекцию плазмидосодержащих клеток Е. coli на среде с ампициллином; либо трансформацию клеток дрожжей K. kurtzmanii рекомбинантной плазмидной ДНК pPH727-Sdh727, содержащей вместо гена SOR1 (PAS_chr1-1_0490) дрожжей K. phaffii (SOR1GS115) ген SOR1 дрожжей K. kurtzmanii (SOR1Y-727). Изобретение обеспечивает расширение арсенала продуцентов рекомбинантных белков на основе K. kurtzmanii, при ферментации которых используют сорбитол. 4 ил., 4 пр.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ экспресс-анализа чувствительности дрожжей к ингибиторам, сопутствующим при производстве пищевой и алкогольной продукции, включающий подготовку тест-организмов, приготовление агаризированной питательной среды, представляющей собой виноградное или солодовое сусло, или среду YPD, или среду YPDF, нагревание ее до температуры 55°С, внесение в нее расчетного количества ингибитора и последующий розлив в стерильные чашки Петри. Посевы проводят путем десяти последовательных уколов иглой со споровой суспензией в толщу плотной среды на 1-2 мм вдоль одной линии на расстоянии 6-7 мм друг от друга. При одновременном использовании двух и более тест-организмов расстояние между посевом следующего тест-организма должно быть не менее 10 мм. Культивирование тест-организмов проводят при температуре 25±2°С в течение 2-х суток в зависимости от интенсивности роста и осуществляют учет результатов путем измерения и суммирования диаметров колонии, выросших на средах с ингибитором и без него; вычисляют угнетение роста дрожжей по представленной формуле. Изобретение обеспечивает возможность предварительной оценки чувствительности дрожжей к ингибиторам и эффективности применения витаминных и питательных препаратов в заданных условиях культивирования. 2 табл., 3 пр. Способ экспресс-анализа чувствительности дрожжей к ингибиторам, сопутствующим при производстве пищевой и алкогольной продукции, включающий подготовку тест-организмов, приготовление питательных сред, проведение посевов, культивирование тест-организмов, вычисление результатов, отличающийся в тем, что для подготовки тест-организмов используют биомассу двухсуточной культуры дрожжей толщиной не менее 1 мм, которая содержит не менее 50-60% почкующихся клеток и не более 5% мертвых, при этом в одном тестировании используют от 1-го до 6-ти тест-организмов одновременно, осуществляют приготовление питательных сред в агаризированной питательной среде, представляющей собой виноградное сусло, или солодовое сусло, или среду YPD, или среду YPDF, нагревая ее до температуры 55°С, вносят в нее расчетное количество ингибитора, предварительно растворенного в стерильной воде, перемешивают, а затем немедленно разливают в три стерильные чашки Петри, проводят посевы путем укола иглой со споровой суспензией, отбирают тест-организмы уколом в биомассу, перенося их в чашку Петри, при этом делают десять последовательных уколов в толщу плотной среды на 1-2 мм вдоль одной линии на расстоянии 6-7 мм друг от друга, при этом при одновременном использовании двух и более тест-организмов расстояние между посевом следующего тест-организма должно быть не менее 10 мм, проводят культивирование тест-организмов при температуре 25±2°С в течение 2-х суток в зависимости от интенсивности роста, при этом при слишком слабом росте тест-организмов и затруднении измерения диаметров колоний до 1 мм проводят дополнительный период культивирования в течение 48 ч, проводят учет результатов путем измерения и суммирования диаметров колонии, выросших на средах с ингибитором и без него, вычисляют угнетение роста дрожжей по формуле (СМ ПАТЕНТ)

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)