Изобретения

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Получен трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий фитазу из Citrobacter freundii, несущий в составе хромосомы оптимизированный синтетический ген, кодирующий указанную фитазу, нуклеотидная последовательность которого приведена в перечне последовательностей под номером SEQ ID NO: 1. Данное изобретение расширяет арсенал рекомбинантных микроорганизмов, продуцирующих фитазы. Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий фитазу из Citrobacter freundii, несущий в составе хромосомы оптимизированный синтетический ген, кодирующий указанную фитазу, нуклеотидная последовательность которого приведена в перечне последовательностей под номером SEQ ID NO: 1.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии и касается получения рекомбинантных штаммов дрожжей Pichia pastoris, способных продуцировать эндо-1,4-?-ксиланазу. Получен трансформант дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы, несущий в составе хромосомы ген, кодирующий эндо-1,4-?-ксиланазу, из Paenibacillus brasilensis, и дополнительные копии гена НАС1 из Pichia pastoris. Изобретение позволяет расширить ассортимент высокоэффективных продуцентов ксиланаз Трансформант дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы, несущий в составе хромосомы ген, кодирующий эндо-1,4-?-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis, и дополнительные копии гена НАС1 из Pichia pastoris.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Получены продуцирующие ?-глюканазу трансформанты дрожжей Pichia pastoris, содержащие ген bgl, кодирующий эндо-?-1,3(4)-D-глюканазу из Bacillus safensis или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 96%. Изобретение позволяет получать фермент с высокой степенью эффективности. 1. Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий ?-глюканазу и содержащий ген bgl, кодирующий эндо-?-1,3(4)-D-глюканазу из Bacillus safensis или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична эндо-?-1,3(4)-D-глюканазе из Bacillus safensis не менее чем на 96%. 2. Трансформант по п. 1, в котором в качестве фермента, аминокислотная последовательность которого гомологична эндо-?-1,3(4)-D-глюканазе из Bacillus safensis не менее чем на 96%, используют эндо-?-1,3(4)-D-глюканазу из Bacillus pumilus, или эндо-?-1,3(4)-D-глюканазу из Bacillus stratosphericus, или эндо-?-1,3(4)-D-глюканазу из Bacillus altitudinis, или эндо-?-1,3(4)-D-глюканазу из Bacillus aerius, или эндо-?-1,3(4)-D-глюканазу из Bacillus cellulasensis, или эндо-?-1,3(4)-D-глюканазу из Bacillus australimaris.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой трансформант дрожжей Komagataella kurtzmanii, продуцирующий эндо-?-1,3(4)-D-глюканазу из Bacillus pumilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 96%, а именно эндо-?-1,3(4)-D-глюканазу из Bacillus safensis, или Bacillus stratosphericus, или Bacillus altitudinis, или Bacillus aerius, или Bacillus cellulasensis, или Bacillus australimaris. Изобретение позволяет получать эндо-?-1,3(4)-D-глюканазу с высокой степенью эффективности. 1. Трансформант дрожжей Komagataella kurtzmanii, продуцирующий ?-глюканазу, содержащий ген bgl, кодирующий эндо-?-l,3(4)-D-глюканазу из Bacillus pumilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична эндо-?-l,3(4)-D-глюканазе из Bacillus pumilus не менее чем на 96%. 2. Трансформант по п. 1, в котором в качестве фермента, аминокислотная последовательность которого гомологична эндо-?-l,3(4)-D-глюканазе из Bacillus pumilus не менее чем на 96%, используют эндо-?-l,3(4)-D-глюканазу из Bacillus safensis, или эндо-?-l,3(4)-D-глюканазу из Bacillus stratosphericus, или эндо-?-l,3(4)-D-глюканазу из Bacillus altitudinis, или эндо-?-l,3(4)-D-глюканазу из Bacillus aerius, или эндо-?-l,3(4)-D-глюканазу из Bacillus cellulasensis, или эндо-?-l,3(4)-D-глюканазу из Bacillus australimaris.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен температурочувствительный мутантный PRP8 мини-интеин из Penicillium chrysogenum для нерастворимой экспрессии в клетках Escherichia coli предшественника целевого белка. Мутантный PRP8 мини-интеин содержит замену аминокислотного остатка лейцина в положении 93 на остаток пролина, замену остатка цистеина в положении 1 на остаток аланина и необязательно содержит замену остатка цистеина в положении 11 на остаток тирозина в исходной последовательности PRP8 мини-интеина из Penicillium chrysogenum, состоящей из 157 аминокислотных остатков. При использовании мутантного интеина совмещаются нерастворимая экспрессия и самовыщепление очищенного белка из фьюжна в процессе ренатурации, не требующей использования протеаз. Степень процессинга для модельного целевого белка SUMO составляет более 50%, а для нейротоксина CVIE - около 60%. Температурочувствительный мутантный PRP8 мини-интеин из Penicillium chrysogenum, для нерастворимой экспрессии в клетках Escherichia coli предшественника целевого белка, содержащий замену аминокислотного остатка лейцина в положении 93 на остаток пролина, замену остатка цистеина в положении 1 на остаток аланина и необязательно содержащий замену остатка цистеина в положении 11 на остаток тирозина в исходной последовательности PRP8 мини-интеина из Penicillium chrysogenum, состоящей из 157 аминокислотных остатков.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к аналитической химии, в частности к количественному определению молочной кислоты как в чистом виде, так и в продуктах питания, биологических и культуральных жидкостях. Способ спектрофотометрического определения молочной кислоты включает добавление исследуемого раствора к раствору хлорида железа(III), взятого в концентрации 0,1-0,3%, измерение оптической плотности полученного раствора при длине волны 380-405 нм и количественное определение концентрации лактата в исходном растворе с использованием калибровочного графика. Способ спектрофотометрического определения молочной кислоты, включающий добавление исследуемого раствора к раствору хлорида железа(III), взятого в концентрации 0,1-0,3%, измерение оптической плотности полученного раствора при длине волны 380-405 нм и количественное определение концентрации лактата в исходном растворе с использованием калибровочного графика.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Группа изобретений относится к микробиологической промышленности. Предложен способ повышения продукции изолимонной кислоты в условиях избытка источника углерода и лимита по азоту с использованием дрожжей Yarrowia lipolytica, в которых усилен уровень экспрессии гена Y. lipolytica YALI0E34672g, кодирующий митохондриальный транспортер YALI0E34672p, участвующий в экспорте изоцитрата из митохондрии. Предложены также дрожжи вида Yarrowia lipolytica, продуцирующие изолимонную кислоту в условиях избытка источника углерода и лимита по азоту, у которых увеличено число копий гена Y. lipolytica YALI0E34672g и/или усилена промоторная область указанного гена. Группа изобретений обеспечивает повышение продукции изолимонной кислоты у дрожжей Yarrowia lipolytica. 1. Способ повышения продукции изолимонной кислоты у дрожжей Yarrowia lipolytica в условиях избытка источника углерода и лимита по азоту путем повышения уровня экспрессии гена Y. lipolytica YALI0E34672g за счет увеличения числа копий гена и/или замены нативного промотора указанного гена на более сильный промотор. 2. Дрожжи вида Yarrowia lipolytica, продуцирующие изолимонную кислоту в условиях избытка источника углерода и лимита по азоту, отличающиеся тем, что в них увеличено число копий гена Y. lipolytica YALI0E34672g и/или усилена промоторная область указанного гена.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Разработан способ получения в дрожжах Saccharomyces cerevisiae секретируемой полностью функциональной фосфолипазы А2, включающей последовательность фосфолипазы А2 штамма Streptomyces violaceoruber А-2688, в том числе несущей мутации S31A, S82A и N108Q, и содержащей на N-конце дополнительный дипептид, состоящий из аминокислотных остатков серина и глицина. Заявляемый способ включает биосинтез предшественника целевого белка, представляющего собой вариант фосфолипазы А2, содержащей инсерцию интеина между остатком глицина в позиции 75 и остатком серина в позиции 76. Также изобретение включает в себя четыре белка-предшественника, которые кодируются последовательностями SEQ ID N: 1-4 соответственно. Удаление инсерции интеина и превращение белка-предшественника в активный целевой белок происходит путем автокаталитического процессинга. 1. Способ получения секретируемой полностью функциональной фосфолипазы А2, осуществляемый путем получения и введения в клетки дрожжей Saccharomyces cerevisiae генетической конструкции, кодирующей белок-предшественник, включающий последовательность нативной, содержащей сайты N-гликозилирования, или мутантной, не содержащей сайтов N-гликозилирования, фосфолипазы А2 штамма Streptomyces violaceoruber А-2688, содержащей инсерцию интеина между остатком глицина в позиции 75 и остатком серина в позиции 76, а также имеющей на N-конце дополнительный дипептид, состоящий из аминокислотных остатков серина и глицина, с последующим биосинтезом этого белка-предшественника и его автокаталитическим процессингом с образованием целевого продукта. 2. Белок-предшественник для осуществления способа по п. 1, кодируемый последовательностью SEQ ID N: 1 и содержащий инсерцию интеина PRP8 штамма Penicillium chrysogenum ВКПМ F-3 в составе нативной фосфолипазы А2 штамма Streptomyces violaceoruber А-2688. 3. Белок-предшественник для осуществления способа по п. 1, кодируемый последовательностью SEQ ID N: 2 и содержащий инсерцию интеина PRP8 штамма Penicillium chrysogenum ВКПМ F-3, несущего мутацию Cys11Tyr, в составе нативной фосфолипазы А2 штамма Streptomyces violaceoruber А-2688. 4. Белок-предшественник для осуществления способа по п. 1, кодируемый последовательностью SEQ ID N: 3 и содержащий инсерцию интеина PRP8 штамма Neosartorya aurata NRRL 4378 в составе мутантной фосфолипазы А2 штамма Streptomyces violaceoruber А-2688, несущей мутации Ser31Ala, Ser82Ala и Asn108Gln. 5. Белок-предшественник для осуществления способа по п. 1, кодируемый последовательностью SEQ ID N: 4 и содержащий инсерцию интеина PRP8 штамма Penicillium chrysogenum ВКПМ F-3, несущего мутацию Cys11Tyr, в составе фосфолипазы А2 Streptomyces violaceoruber А-2688, несущей мутации Ser31Ala, Ser82Ala и Asn108Gln.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при получении гетерогенных биокатализаторов для процессов биокаталитической трансформации органических соединений. Способ получения гетерогенного биокатализатора предусматривает избирательную адсорбцию липазы из Candida antarctica фракции В на гидрофобном макропористом носителе в процессе инкубации частиц носителя в водном концентрате культуральной жидкости штамма дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-4298 с удельной ферментативной активностью не менее 350 ЛЕ/мг белка и последующую ковалентную модификацию адсорбированного фермента глутаровым альдегидом, добавляемым непосредственно в инкубационную суспензию до конечной концентрации его 1,0-2,5%. Процесс инкубации продолжают в течение 30-120 мин. Изобретение позволяет повысить активность и термическую стабильность биокатализатора. Способ получения гетерогенного биокатализатора на основе фермента - липазы дрожжей Candida antarctica фракции В путем адсорбции этого фермента на гидрофобном макропористом носителе в процессе инкубации частиц носителя в водном растворе, содержащем фермент, отличающийся тем, что в качестве водного раствора, содержащего фермент, используют концентрат культуральной жидкости штамма дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-4298 с удельной ферментативной активностью не менее 350 ЛЕ/мг белка, а адсорбированный на носителе фермент по окончании инкубации модифицируют путем добавления глутарового альдегида непосредственно в инкубационную суспензию до конечной его концентрации 1,0?2,5% и продолжают процесс инкубации в тех же условиях в течение 30?120 мин.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения гетерогенного биокатализатора на основе гидролазы эфиров альфа-аминокислот (AEH) из рекомбинантных бактерий Escherichia coli, несущих ген aehR из Xanthomonas rubrilineans. Для осуществления способа указанные рекомбинантные бактерии культивируют в подходящих условиях, затем разрушают клетки биомассы методом гомогенизации высокого давления для получения гомогената. После чего проводят иммобилизацию содержащейся в гомогенате гидролазы эфиров альфа-аминокислот путем формирования ферментных агрегатов под действием осадителя - сульфата аммония или полиэтиленгликоля - с последующей стадией сшивки этих агрегатов глутаровым альдегидом в присутствии водорастворимого производного аминополисахарида хитозана. Полученные гетерогенные биокатализаторы используют для ферментативного синтеза аминобета-лактамных антибиотиков, например цефалексина, цефпрозила, цефаклора, ампициллина, амоксициллина, путем ацилирования ключевых бета-лактамных соединений соответствующими производными эфира D-аминофенилуксусной кислоты. Настоящее изобретение позволяет получить гетерогенные биокатализаторы с повышенной синтетазной активностью. 1. Способ получения гетерогенного биокатализатора на основе гидролазы эфиров альфа-аминокислот из бактерий, несущих ген aehR из Xanthomonas rubrilineans, включающий получение биомассы штамма бактерий, содержащих ген aehR из Xanthomonas rubrilineans путем культивирования этого штамма в подходящих условиях, разрушения клеток биомассы для получения гомогената с последующей иммобилизацией содержащейся в гомогенате гидролазы эфиров альфа-аминокислот путем формирования ферментных агрегатов под действием осадителя и последующей поперечной сшивки этих агрегатов глутаровым альдегидом, отличающийся тем, что для получения биомассы используют рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli, несущий ген aehR из Xanthomonas rubrilineans; получение гомогената осуществляют путем разрушения клеток полученной биомассы методом гомогенизации высокого давления; формирование ферментных агрегатов непосредственно из полученного гомогената под действием осадителя: сульфата аммония или полиэтиленгликоля, а также последующую поперечную сшивку агрегатов глутаровым альдегидом проводят в присутствии водорастворимого производного аминополисахарида хитозана. 2. Гетерогенный биокатализатор на основе гидролазы эфиров альфа-аминокислот из бактерий, несущих ген aehR из Xanthomonas rubrilineans, полученный способом по п.1 из рекомбинантного штамма бактерий Escherichia coli ВКПМ В-11271. 3. Гетерогенный биокатализатор на основе гидролазы эфиров альфа-аминокислот из бактерий, несущих ген aehR из Xanthomonas rubrilineans, полученный способом по п.1 из рекомбинантного штамма бактерий Escherichia coli ВКПМ В-11246. 4. Способ синтеза аминобета-лактамного антибиотика путем ацилирования ключевого бета-лактамного соединения соответствующим производным эфира D-аминофенилуксусной кислоты, под действием гетерогенного биокатализатора на основе гидролазы эфиров альфа-аминокислот из бактерий, несущих ген aehR Xanthomonas rubrilineans, отличающийся тем, что для осуществления синтеза используют гетерогенный биокатализатор, полученный способом по п.1.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)