Изобретения

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ выделения липидов для биодизеля из биомассы микроводоросли рода Chlorella. Способ включает гомогенизацию сухой биомассы микроводоросли измельчением, обработку смесью органических растворителей хлороформ-метанол или хлороформ-этанол в соотношении 1:2-2:1. Суспензию биомассы подвергают обработке ультразвуком с частотой 30-50 кГц в течение 5-20 минут и отделяют липиды. Изобретение обеспечивает повышение выхода целевого продукта. 1. Способ выделения липидов из биомассы микроводоросли рода Chlorella, заключающийся в том, что биомассу микроводоросли обрабатывают органическим растворителем и полученные липиды отделяют, при этом указанные операции проводят дважды с последующим объединением целевого продукта, отличающийся тем, что предварительно сухую биомассу микроводоросли с влагосодержанием не более 10% гомогенизируют измельчением, а после первой обработки биомассы органическим растворителем полученную суспензию биомассы обрабатывают ультразвуком. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что обработку ультразвуком проводят с частотой 30-50 кГц в течение 5-20 минут. 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют смесь хлороформ-метанол в соотношении 1:2-2:1. 4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют смесь хлороформ-этанол в соотношении 1:2-2:1.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен температурочувствительный мутантный PRP8 мини-интеин из Penicillium chrysogenum для нерастворимой экспрессии в клетках Escherichia coli предшественника целевого белка. Мутантный PRP8 мини-интеин содержит замену аминокислотного остатка лейцина в положении 93 на остаток пролина, замену остатка цистеина в положении 1 на остаток аланина и необязательно содержит замену остатка цистеина в положении 11 на остаток тирозина в исходной последовательности PRP8 мини-интеина из Penicillium chrysogenum, состоящей из 157 аминокислотных остатков. При использовании мутантного интеина совмещаются нерастворимая экспрессия и самовыщепление очищенного белка из фьюжна в процессе ренатурации, не требующей использования протеаз. Степень процессинга для модельного целевого белка SUMO составляет более 50%, а для нейротоксина CVIE - около 60%. Температурочувствительный мутантный PRP8 мини-интеин из Penicillium chrysogenum, для нерастворимой экспрессии в клетках Escherichia coli предшественника целевого белка, содержащий замену аминокислотного остатка лейцина в положении 93 на остаток пролина, замену остатка цистеина в положении 1 на остаток аланина и необязательно содержащий замену остатка цистеина в положении 11 на остаток тирозина в исходной последовательности PRP8 мини-интеина из Penicillium chrysogenum, состоящей из 157 аминокислотных остатков.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен трансформант дрожжей Komagataella phaffii, продуцирующий химозин альпака Vicugna pacos в активной форме и содержащий в хромосомной ДНК оптимизированный синтетический ген прохимозина альпака Vicugna pacos, нуклеотидная последовательность которого приведена в перечне последовательностей под номером SEQ ID NO: 1. Также предложен штамм K. phaffii N416 ВКПМ Y-5079 - продуцент химозина альпака Vicugna pacos в активной форме. Изобретение обеспечивает расширение арсенала дрожжевых рекомбинантных микроорганизмов, продуцирующих химозин в активной форме. 1. Трансформант дрожжей Komagataella phaffii - продуцент химозина альпака Vicugna pacos в активной форме, содержащий в хромосомной ДНК оптимизированный синтетический ген прохимозина альпака Vicugna pacos, нуклеотидная последовательность которого приведена в перечне последовательностей под номером SEQ ID NO: 1. 2. Штамм K. phaffii N416 ВКПМ Y-5079 - продуцент химозина альпака Vicugna pacos в активной форме.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен трансформант дрожжей Yarrowia lipolytica, продуцирующий каротиноид кантаксантин и содержащий в составе хромосомы по крайней мере по одной копии каждого из следующих генов: ген CarB М. circinelloides, кодирующий фитоендегидрогеназу, ген CarRP М. circinelloides, кодирующий бифункциональный фермент фитоен синтазу/ликопин ?-циклазу, ген HMGR1 Y. lipolytica, кодирующий фермент 3-гидрокси-3-метилглютарил-кофермент А редуктазу, ген ERG20 Y. lipolytica, кодирующий фарнезилпирофосфатсинтазу, ген ERG12 Y. lipolytica, кодирующий мевалонаткиназу, нуклеотидную последовательность CarRP-GGPPs7, кодирующую полипептид, полученный в результате объединения бифункционального фермента фитоен синтазы/ликопин ?-циклазы carRP М. circinelloides и геранилгеранилпирофосфат синтазы GGPPs7 Synechococcus sp, нуклеотидную последовательность CarRP-ERG20(F88C), кодирующую полипептид, полученный в результате объединения carRP М. circinelloides и модифицированного варианта фарнезилпирофосфатсинтазы ERG20F88C Y. Lipolytica, кодон-оптимизированный ген НрВКТ Haematococcus pluvialis, кодирующий ?-каротин кетолазу, нуклеотидная последовательность которого приведена в перечне последовательностей под номером SEQ ID NO: l, кодон-оптимизированный ген SpHXKl Schizosaccharomyces pombe, кодирующий гексокиназу, нуклеотидная последовательность которого приведена в перечне последовательностей под номером SEQ ID NO: 2, кодон-оптимизированный ген YHT1 Y. lipolytica, кодирующий транспортер гексозы, нуклеотидная последовательность которого приведена в перечне последовательностей под номером SEQ ID NO: 3, кодон-оптимизированный ген YHT3 Y. lipolytica, кодирующий транспортер гексозы, нуклеотидная последовательность которого приведена в перечне последовательностей под номером SEQ ID NO: 5, кодон-оптимизированный ген YHT4 Y. lipolytica, кодирующий транспортер гексозы, нуклеотидная последовательность которого приведена в перечне последовательностей под номером SEQ ID NO: 7. Также предложен рекомбинантный штамм дрожжей Y. lipolytica ВКПМ Y-5144 - продуцент кантаксантина. Изобретение обеспечивает расширение арсенала микроорганизмов, продуцирующих каротиноид кантаксантин. 2 н.п. ф-лы, 5 ил., 5 табл., 3 пр.

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный исследовательский центр «Курчатовский институт» (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен трансформант дрожжей Komagataella phaffii, продуцирующих химозин Vicugna pacos в активной форме, содержащий в хромосомной ДНК оптимизированный синтетический ген прохимозина альпака Vicugna pacos, нуклеотидная последовательность которого приведена в перечне последовательностей под номером SEQ ID NO: 1, и ген ScHAC1 из Saccharomyces cerevisiae. Также предложен штамм Komagataella phaffii N509 ВКПМ Y-5150, являющийся продуцентом рекомбинантного химозина альпака Vicugna pacos в активной форме. Изобретение обеспечивает расширение арсенала дрожжевых рекомбинантных микроорганизмов, продуцирующих химозин альпака Vicugna pacos в активной форме. 2 н.п. ф-лы, 2 ил., 5 табл., 4 пр.

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный исследовательский центр «Курчатовский институт» (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии. Разработан способ получения фермента метионин-гамма-лиазы (МГЛ) и противоопухолевое лекарственное средство ГЛФ МГЛ на основе этого фермента. Способ с использованием штамма Е.coli MDG1216 позволяет синтезировать до 45% МГЛ, в расчете на суммарный клеточный белок, с удельной активностью от 15 до 32 ед./мг с Km порядка 0,7±0,11 mM в реакциях ?-элиминирования для природного субстрата L-метионина. Заявляемое лекарственное средство ГЛФ МГЛ обладает противоопухолевым эффектом (более 50% ТРО), что продемонстрировано при применении его для торможения роста опухоли - меланома В 16 - путем комбинированной терапии в сочетании с пиридоксином, а также для торможения роста опухоли - немелкоклеточный рак легкого человека - путем комбинированной терапии в сочетании с дексорубицином. 1. Способ получения фермента метионин-гамма-лиазы путем культивирования рекомбинантного штамма-продуцента Esherichia coli на среде, содержашей триптон, дрожжевой экстракт, глицерин и глюкозу в фосфатном буфере, индукции биосинтеза фермента лактозой и изопропил-бета-D-1-тиогалактопиранозидом, очисткой фермента методами хроматографии и ультрафильтрации, отличающийся тем, что в качестве штамма-продуцента используют штамм Esherichia coli ПКПМ В-13174, в среду для культивирования дополнительно добавляют сульфат аммония от 25 до 60 г/л и гидроксид натрия от 0,5 до 4 г/л, а в стадию очистки дополнительно включают термообработку в присутствии этилового спирта при 50°С, причем гидроксид натрия вносят на последней стадии биосинтеза. 2. Применение метионин-гамма-лиазы, полученной способом по п.1, для торможения роста опухоли – немелкоклеточного рака легкого человека – путем комбинированной терапии в сочетании с доксорубицином.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к области биохимии и биотехнологии. Штамм Escherichia coli ВКПМ В-10996 культивируют на питательной среде КС, содержащей, мас.%: пептон 2-4, дрожжевой экстракт 1-2 и вода - остальное в присутствии селективного антибиотика до стационарной фазы роста при температуре от 20 до 30°С. Разводят полученную культуру свежей порцией той же среды в соотношении от 1:1 до 1:3. Одновременно вносят индуктор и продолжают культивировать в течение не менее 4 часов. Проводят очистку синтезированной протеиназы. Это обеспечивает получение ферментативно активной протеиназы Ulp275 - варианта SUMO-протеиназы Ulp1 дрожжей Saccharomyces cerevisiae, которая включает в свой состав каталитический домен протеиназы Ulp1 и содержит на С-конце последовательность из 6 остатков гистидина. 9 пр.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к области биохимии. Предложен неконкурентный ингибитор тимидинфосфорилаз пептидной природы H-Trp-Met(О2)-Phe-NH2. Изобретение обеспечивает получение неконкурентного ингибитора тимидинфосфорилаз пептидной природы, который потенциально можно использовать для лечения онкологических заболеваний. 3 ил.

Федеральное государственное учреждение "Федеральный научно-исследовательский центр "Кристаллография и фотоника" Российской академии наук" (RU)

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ получения гранулированного биокатализатора на основе иммобилизованных клеток дрожжей. Способ включает наращивание биомассы дрожжей Yarrowia lipolytica ВКПМ Y-3600, отделение биомассы, лиофильную сушку биомассы, приготовление суспензии биомассы, путем добавления натрий-фосфатного буфера к биомассе, получение полиакриламидного геля с иммобилизованной биомассой и добавление додецилового спирта к полиакриламидному гелю с биомассой для образования гранул с иммобилизованной биомассой. Причем для получения полиакриламидного геля с иммобилизованной биомассой осуществляют смешение суспензии биомассы с гранулированным порошком полиакриламида марки Superfloc® N-300. Изобретение обеспечивает ускорение и упрощение способа получения биокатализатора. 1. Способ получения гранулированного биокатализатора на основе иммобилизованных клеток дрожжей, характеризующийся тем, что включает наращивание биомассы дрожжей вида Yarrowia lipolytica ВКПМ Y-3600 - продуцента клеточно-связанной липазы, отделение биомассы, лиофильную сушку биомассы, приготовление суспензии биомассы путем добавления натрий-фосфатного буфера к биомассе, получение полиакриламидного геля с иммобилизованной биомассой, причем для этого осуществляют смешение суспензии биомассы с гранулированным порошком полиакриламида марки Superfloc® N-300, и последующее добавление додецилового спирта к полиакриламидному гелю с биомассой для образования гранул с иммобилизованной биомассой. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что смешение суспензии биомассы с полиакриламидом осуществляют путем добавления суспензии биомассы в полиакриламид в соотношении 0,7 мл на 0,1 г. 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что смешение суспензии биомассы с полиакриламидом осуществляют путем добавления полиакриламида в суспензию биомассы в соотношении 0,1 г на 0,7 мл. 4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что обработку полиакриламидного геля с иммобилизованной биомассой додециловым спиртом проводят в течение не менее 24 часов при периодическом перемешивании не менее 2 раз. 5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что обработку полиакриламидного геля с иммобилизованной биомассой додециловым спиртом проводят через 15-20 мин после иммобилизации биомассы в полиакриламидном геле.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ получения наночастиц элементного аморфного селена. Способ включает внесение селенита натрия в культуру фототрофных бактерий Rhodobacter capsulatus В10 из расчета 5 мМ/л, инкубирование культуры с селенитом, отделение селена от культуральной среды и бактерий. Полученный осадок селена разбавляют лизирующим составом, инкубируют и центрифугируют. Полученный осадок дополнительно центрифугируют в градиенте водного раствора сахарозы. Градиент сформирован из последовательных слоев 80%, 60% и 40% водных растворов сахарозы. Изобретение обеспечивает ускорение способа получения однородного по размеру (280±45нм) аморфного красного селена, при более полной мягкой очистки полученных частиц от клеток бактерий и клеточных фрагментов без нарушения аллотропной модификации селена. Способ получения наночастиц элементного аморфного селена, содержащий подготовку инокулята фототрофных бактерий, внесение селенита натрия в культуру фототрофных бактерий, отделение селена от культуральной среды и бактерий первичным центрифугированием, разбавлением осадка и последующим многостадийным центрифугированием, промывку наночастиц селена деионизированной водой, отличающийся тем, что используют фототрофные бактерии Rhodobacter capsulatus В10, селенит натрия вносят в культуру фототрофных бактерий из расчета 5 мМ/л, культуру инкубируют с селенитом в течение 24 часов в анаэробных условиях при 2000 люкс и температуре 20-25°С с последующим первичным центрифугированием, где полученный осадок разбавляют лизирующим составом и инкубируют 12-48 часов в темноте с последующим центрифугированием, где полученный осадок дополнительно центрифугируют в градиенте водного раствора сахарозы, сформированного из последовательных слоев 80%, 60%, и 40% водных растворов сахарозы, причем после промывки наночастиц селена деионизированной водой осуществляют их центрифугирование и высушивание.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)