|
№
|
||||||
|---|---|---|---|---|---|---|
|
61
|
2849637
|
Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Предложен штамм дрожжей Komagataella mondaviorum K7 ВКПМ Y-5249 с инактивированным геном HIS4 - реципиент для конструирования безмаркерных штаммов-продуцентов гетерологичных белков. Изобретение позволяет получить штамм-реципиент, обеспечивающий возможность получать высокопродуктивные безмаркерные Штаммы микроорганизмов-продуценты гетерологичных белков.
Основное назначение
Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Предложен штамм дрожжей Komagataella mondaviorum K7 ВКПМ Y-5249 с инактивированным геном HIS4 - реципиент для конструирования безмаркерных штаммов-продуцентов гетерологичных белков. Изобретение позволяет получить штамм-реципиент, обеспечивающий возможность получать высокопродуктивные безмаркерные Штаммы микроорганизмов-продуценты гетерологичных белков.
|
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
Основное назначение
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
|
Штамм дрожжей Komagataella mondaviorum K7 ВКПМ Y-5249 с инактивированным геном HIS4 - реципиент для конструирования безмаркерных штаммов-продуцентов гетерологичных белков.
Основное назначение
Штамм дрожжей Komagataella mondaviorum K7 ВКПМ Y-5249 с инактивированным геном HIS4 - реципиент для конструирования безмаркерных штаммов-продуцентов гетерологичных белков.
|
||
|
62
|
2854313
|
Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии и касается рекомбинантного штамма дрожжей Schizosaccharomyces pombe - продуцента L-молочной кислоты, не продуцирующего этанол. Предложен штамм дрожжей Schizosaccharomyces pombe ВКПМ Y-5156, несущий в составе хромосомы два гена L-лактатдегидрогеназы из Lactobacillus pentosus, один из которых заместил ген алкогольдегидрогеназы 1, и содержащий ген L-лактатдегидрогеназы из Lactobacillus acidophilus. Изобретение обеспечивает получение штамма дрожжей с повышенной продукцией L-молочной кислоты и не образующего этанол в качестве побочного продукта.
Основное назначение
Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии и касается рекомбинантного штамма дрожжей Schizosaccharomyces pombe - продуцента L-молочной кислоты, не продуцирующего этанол. Предложен штамм дрожжей Schizosaccharomyces pombe ВКПМ Y-5156, несущий в составе хромосомы два гена L-лактатдегидрогеназы из Lactobacillus pentosus, один из которых заместил ген алкогольдегидрогеназы 1, и содержащий ген L-лактатдегидрогеназы из Lactobacillus acidophilus. Изобретение обеспечивает получение штамма дрожжей с повышенной продукцией L-молочной кислоты и не образующего этанол в качестве побочного продукта.
|
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
Основное назначение
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
|
Штамм дрожжей Schizosaccharomyces pombe ВКПМ Y-5156, несущий в составе хромосомы два гена L-лактатдегидрогеназы из Lactobacillus pentosus, один из которых заместил ген алкогольдегидрогеназы 1, и содержащий ген L-лактатдегидрогеназы из Lactobacillus acidophilus - продуцент молочной кислоты, не продуцирующий этанол.
Основное назначение
Штамм дрожжей Schizosaccharomyces pombe ВКПМ Y-5156, несущий в составе хромосомы два гена L-лактатдегидрогеназы из Lactobacillus pentosus, один из которых заместил ген алкогольдегидрогеназы 1, и содержащий ген L-лактатдегидрогеназы из Lactobacillus acidophilus - продуцент молочной кислоты, не продуцирующий этанол.
|
||
|
63
|
2854312
|
Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложена рекомбинантная мутантная ксилоглюканаза AsCeGH12b-m2, имеющая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, которая соответствует аминокислотной последовательности ксилоглюканазы семейства 12 из Aspergillus cervinus ВКПМ F-612 с заменой природного остатка лейцина в положении 18 остатком изолейцина и остатка тирозина в положении 37 остатком валина, обеспечивающим повышение термостабильности модифицированного фермента по сравнению с ферментом дикого типа. Также предложен рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-5262 - продуцент секретируемой ксилоглюканазы AsCeGH12b-m2, имеющей SEQ ID NO: 1 и кодируемой геном AsCeGH12b-m2, имеющим SEQ ID NO: 2. Разработан способ микробиологического синтеза ксилоглюканазы AsCeGH12b-m2, предусматривающий культивирование указанного штамма в аэробных условиях в подходящей питательной среде. Изобретение обеспечивает высокий уровень продукции ксилоглюканазы AsCeGH12b-m2 с повышенной термостабильностью, а также эффективное снижение вязкости растворов ксилоглюкана.
Основное назначение
Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложена рекомбинантная мутантная ксилоглюканаза AsCeGH12b-m2, имеющая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, которая соответствует аминокислотной последовательности ксилоглюканазы семейства 12 из Aspergillus cervinus ВКПМ F-612 с заменой природного остатка лейцина в положении 18 остатком изолейцина и остатка тирозина в положении 37 остатком валина, обеспечивающим повышение термостабильности модифицированного фермента по сравнению с ферментом дикого типа. Также предложен рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-5262 - продуцент секретируемой ксилоглюканазы AsCeGH12b-m2, имеющей SEQ ID NO: 1 и кодируемой геном AsCeGH12b-m2, имеющим SEQ ID NO: 2. Разработан способ микробиологического синтеза ксилоглюканазы AsCeGH12b-m2, предусматривающий культивирование указанного штамма в аэробных условиях в подходящей питательной среде. Изобретение обеспечивает высокий уровень продукции ксилоглюканазы AsCeGH12b-m2 с повышенной термостабильностью, а также эффективное снижение вязкости растворов ксилоглюкана.
|
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
Основное назначение
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
|
Рекомбинантная мутантная ксилоглюканаза AsCeGH12b-m2, имеющая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, которая соответствует аминокислотной последовательности ксилоглюканазы семейства 12 из Aspergillus cervinus ВКПМ F-612 с заменой природного остатка лейцина в положении 18 остатком изолейцина и остатка тирозина в положении 37 остатком валина, обеспечивающим повышение термостабильности модифицированного фермента по сравнению с ферментом дикого типа.
2. Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-5262 - продуцент секретируемой ксилоглюканазы AsCeGH12b-m2 по п. 1, имеющей SEQ ID NO: 1 и кодируемой геном AsCeGH12b-m2, имеющим SEQ ID NO: 2.
3. Способ микробиологического синтеза рекомбинантной мутантной ксилоглюканазы AsCeGH12b-m2 по п. 1, предусматривающий культивирование рекомбинантного штамма Pichia pastoris по п. 2 в аэробных условиях в подходящей питательной среде.
Основное назначение
Рекомбинантная мутантная ксилоглюканаза AsCeGH12b-m2, имеющая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, которая соответствует аминокислотной последовательности ксилоглюканазы семейства 12 из Aspergillus cervinus ВКПМ F-612 с заменой природного остатка лейцина в положении 18 остатком изолейцина и остатка тирозина в положении 37 остатком валина, обеспечивающим повышение термостабильности модифицированного фермента по сравнению с ферментом дикого типа.
2. Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-5262 - продуцент секретируемой ксилоглюканазы AsCeGH12b-m2 по п. 1, имеющей SEQ ID NO: 1 и кодируемой геном AsCeGH12b-m2, имеющим SEQ ID NO: 2.
3. Способ микробиологического синтеза рекомбинантной мутантной ксилоглюканазы AsCeGH12b-m2 по п. 1, предусматривающий культивирование рекомбинантного штамма Pichia pastoris по п. 2 в аэробных условиях в подходящей питательной среде.
|
||
|
64
|
2853994
|
Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Получен штамм дрожжей Komagataella mondaviorum L7 ВКПМ Y-5248 с инактивированным геном LEU2, являющимся реципиентом для конструирования безмаркерных штаммов-продуцентов гетерологичных белков. Изобретение обеспечивает получение штамма-реципиента, который даст возможность получать безмаркерные Штаммы микроорганизмов-продуценты гетерологичных белков.
Основное назначение
Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Получен штамм дрожжей Komagataella mondaviorum L7 ВКПМ Y-5248 с инактивированным геном LEU2, являющимся реципиентом для конструирования безмаркерных штаммов-продуцентов гетерологичных белков. Изобретение обеспечивает получение штамма-реципиента, который даст возможность получать безмаркерные Штаммы микроорганизмов-продуценты гетерологичных белков.
|
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
Основное назначение
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
|
Штамм дрожжей Komagataella mondaviorum L7 ВКПМ Y-5248 с инактивированным геном LEU2 - реципиент для конструирования безмаркерных штаммов-продуцентов гетерологичных белков.
Основное назначение
Штамм дрожжей Komagataella mondaviorum L7 ВКПМ Y-5248 с инактивированным геном LEU2 - реципиент для конструирования безмаркерных штаммов-продуцентов гетерологичных белков.
|
||
|
65
|
2788528
|
Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Предложен штамм дрожжей Komagataella phaffii YLM9 с инактивированным геном LEU2, являющийся реципиентом для конструирования штаммов-продуцентов гетерологичных белков. Указанный штамм депонирован под номером ВКПМ Y-5014. Изобретение обеспечивает получение штамма-реципиента, который позволяет получать высокопродуктивные безмаркерные Штаммы микроорганизмов-продуценты гетерологичных белков.
Основное назначение
Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Предложен штамм дрожжей Komagataella phaffii YLM9 с инактивированным геном LEU2, являющийся реципиентом для конструирования штаммов-продуцентов гетерологичных белков. Указанный штамм депонирован под номером ВКПМ Y-5014. Изобретение обеспечивает получение штамма-реципиента, который позволяет получать высокопродуктивные безмаркерные Штаммы микроорганизмов-продуценты гетерологичных белков.
|
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
Основное назначение
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
|
Штамм дрожжей Komagataella phaffii YLM9 ВКПМ Y-5014 с инактивированным геном LEU2 - реципиент для конструирования штаммов-продуцентов гетерологичных белков.
Основное назначение
Штамм дрожжей Komagataella phaffii YLM9 ВКПМ Y-5014 с инактивированным геном LEU2 - реципиент для конструирования штаммов-продуцентов гетерологичных белков.
|
||
|
66
|
2787584
|
Изобретение относится к области биохимии, в частности к штамму дрожжей Komagataella phaffii TGBF7 ВКПМ Y-5013 с инактивированным геном HIS4. Заявленное изобретение позволяет эффективно конструировать безмаркерный штамм дрожжей Komagataella phaffii для получения гетерологичных белков.
Основное назначение
Изобретение относится к области биохимии, в частности к штамму дрожжей Komagataella phaffii TGBF7 ВКПМ Y-5013 с инактивированным геном HIS4. Заявленное изобретение позволяет эффективно конструировать безмаркерный штамм дрожжей Komagataella phaffii для получения гетерологичных белков.
|
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
Основное назначение
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
|
Штамм дрожжей Komagataella phaffii TGBF7 ВКПМ Y-5013 с инактивированным геном HIS4 - реципиент для конструирования безмаркерных штаммов-продуцентов гетерологичных белков.
Основное назначение
Штамм дрожжей Komagataella phaffii TGBF7 ВКПМ Y-5013 с инактивированным геном HIS4 - реципиент для конструирования безмаркерных штаммов-продуцентов гетерологичных белков.
|
||
|
67
|
Патент 2845191
|
Изобретение относится к микробиологии и винодельческой промышленности. Предложен штамм Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-5167 фенотипа киллер для производства белых сухих вин из винограда сорта Кокур белый. Заявленное изобретение позволяет сбраживать виноградное сусло с повышенной концентрацией диоксида серы, способствовать получению вин с интенсивным ароматом и разнообразным ароматическим профилем. Использование заявленного штамма снижает риски спонтанного брожения, подавляет развитие посторонней микрофлоры. Штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-5167 фенотипа киллер для производства белых сухих вин из винограда сорта Кокур белый.
Основное назначение
Изобретение относится к микробиологии и винодельческой промышленности. Предложен штамм Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-5167 фенотипа киллер для производства белых сухих вин из винограда сорта Кокур белый. Заявленное изобретение позволяет сбраживать виноградное сусло с повышенной концентрацией диоксида серы, способствовать получению вин с интенсивным ароматом и разнообразным ароматическим профилем. Использование заявленного штамма снижает риски спонтанного брожения, подавляет развитие посторонней микрофлоры. Штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-5167 фенотипа киллер для производства белых сухих вин из винограда сорта Кокур белый.
|
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
Основное назначение
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
|
Штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-5167 фенотипа киллер для производства белых сухих вин из винограда сорта Кокур белый.
Основное назначение
Штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-5167 фенотипа киллер для производства белых сухих вин из винограда сорта Кокур белый.
|
||
|
68
|
Патент 2844965
|
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой штамм дрожжей Komagataella phaffii ER1 ВКПМ Y-5229, ауксотрофный по гистидину, с инактивированным геном OPI1, который является штаммом-реципиентом, позволяющим получать Штаммы микроорганизмов-продуценты с повышенной продукцией гетерологичных белков Штамм дрожжей Komagataella phaffii ER1 ВКПМ Y-5229, ауксотрофный по гистидину, с инактивированным геном OPI1 - реципиент для конструирования штаммов-продуцентов гетерологичных белков.
Основное назначение
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой штамм дрожжей Komagataella phaffii ER1 ВКПМ Y-5229, ауксотрофный по гистидину, с инактивированным геном OPI1, который является штаммом-реципиентом, позволяющим получать Штаммы микроорганизмов-продуценты с повышенной продукцией гетерологичных белков Штамм дрожжей Komagataella phaffii ER1 ВКПМ Y-5229, ауксотрофный по гистидину, с инактивированным геном OPI1 - реципиент для конструирования штаммов-продуцентов гетерологичных белков.
|
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
Основное назначение
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
|
Штамм дрожжей Komagataella phaffii ER1 ВКПМ Y-5229, ауксотрофный по гистидину, с инактивированным геном OPI1 - реципиент для конструирования штаммов-продуцентов гетерологичных белков.
Основное назначение
Штамм дрожжей Komagataella phaffii ER1 ВКПМ Y-5229, ауксотрофный по гистидину, с инактивированным геном OPI1 - реципиент для конструирования штаммов-продуцентов гетерологичных белков.
|
||
|
69
|
Патент 2451023
|
Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения рекомбинантных белков паутины паука-кругопряда в клетках дрожжей, слитых белков, содержащих последовательности рекомбинантных белков паутины паука-кругопряда, рекомбинантных ДНК, кодирующих слитые белки, клеток-хозяев дрожжей и векторов экспрессии, используемых для осуществления способа, а также штаммов - продуцентов рекомбинантных белков паутины паука-кругопряда. Способ включает конструирование вектора экспрессии, содержащего последовательность ДНК, кодирующую рекомбинантный белок паутины паука-кругопряда, слитую с последовательностью, кодирующую убиквитин или убиквитин-подобный белок SUMO дрожжей Saccharomyces cerevisiae, которая занимает в составе слитого белка N-концевое положение по отношению к рекомбинантному белку паутины, трансформацию клеток дрожжей полученным вектором экспрессии и экспрессию в трансформированных клетках белка паутины паука-кругопряда. Представленный способ позволяет увеличить продукцию рекомбинантного белка паутины при накоплении последнего в клетках дрожжей в водонерастворимой фракции в виде белка, не содержащего гибридный компонент. 7 н. и 17 з.п. ф-лы, 6 ил., 12 пр.
Основное назначение
Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения рекомбинантных белков паутины паука-кругопряда в клетках дрожжей, слитых белков, содержащих последовательности рекомбинантных белков паутины паука-кругопряда, рекомбинантных ДНК, кодирующих слитые белки, клеток-хозяев дрожжей и векторов экспрессии, используемых для осуществления способа, а также штаммов - продуцентов рекомбинантных белков паутины паука-кругопряда. Способ включает конструирование вектора экспрессии, содержащего последовательность ДНК, кодирующую рекомбинантный белок паутины паука-кругопряда, слитую с последовательностью, кодирующую убиквитин или убиквитин-подобный белок SUMO дрожжей Saccharomyces cerevisiae, которая занимает в составе слитого белка N-концевое положение по отношению к рекомбинантному белку паутины, трансформацию клеток дрожжей полученным вектором экспрессии и экспрессию в трансформированных клетках белка паутины паука-кругопряда. Представленный способ позволяет увеличить продукцию рекомбинантного белка паутины при накоплении последнего в клетках дрожжей в водонерастворимой фракции в виде белка, не содержащего гибридный компонент. 7 н. и 17 з.п. ф-лы, 6 ил., 12 пр.
|
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
Основное назначение
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
|
Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения рекомбинантных белков паутины паука-кругопряда в клетках дрожжей, слитых белков, содержащих последовательности рекомбинантных белков паутины паука-кругопряда, рекомбинантных ДНК, кодирующих слитые белки, клеток-хозяев дрожжей и векторов экспрессии, используемых для осуществления способа, а также штаммов - продуцентов рекомбинантных белков паутины паука-кругопряда. Способ включает конструирование вектора экспрессии, содержащего последовательность ДНК, кодирующую рекомбинантный белок паутины паука-кругопряда, слитую с последовательностью, кодирующую убиквитин или убиквитин-подобный белок SUMO дрожжей Saccharomyces cerevisiae, которая занимает в составе слитого белка N-концевое положение по отношению к рекомбинантному белку паутины, трансформацию клеток дрожжей полученным вектором экспрессии и экспрессию в трансформированных клетках белка паутины паука-кругопряда. Представленный способ позволяет увеличить продукцию рекомбинантного белка паутины при накоплении последнего в клетках дрожжей в водонерастворимой фракции в виде белка, не содержащего гибридный компонент. 7 н. и 17 з.п. ф-лы, 6 ил., 12 пр.
Основное назначение
Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения рекомбинантных белков паутины паука-кругопряда в клетках дрожжей, слитых белков, содержащих последовательности рекомбинантных белков паутины паука-кругопряда, рекомбинантных ДНК, кодирующих слитые белки, клеток-хозяев дрожжей и векторов экспрессии, используемых для осуществления способа, а также штаммов - продуцентов рекомбинантных белков паутины паука-кругопряда. Способ включает конструирование вектора экспрессии, содержащего последовательность ДНК, кодирующую рекомбинантный белок паутины паука-кругопряда, слитую с последовательностью, кодирующую убиквитин или убиквитин-подобный белок SUMO дрожжей Saccharomyces cerevisiae, которая занимает в составе слитого белка N-концевое положение по отношению к рекомбинантному белку паутины, трансформацию клеток дрожжей полученным вектором экспрессии и экспрессию в трансформированных клетках белка паутины паука-кругопряда. Представленный способ позволяет увеличить продукцию рекомбинантного белка паутины при накоплении последнего в клетках дрожжей в водонерастворимой фракции в виде белка, не содержащего гибридный компонент. 7 н. и 17 з.п. ф-лы, 6 ил., 12 пр.
|
||
|
70
|
Патент 2509154
|
Изобретение относится к области биотехнологии и генной инженерии и представляет собой рекомбинантную плазмиду pHisTevTSIB0821 для экспрессии в клетках Escherichia coli пролидазы TSIB_0821 из археи Thermococcus sibiricus. Заявленная плазмида включает NdeI/SalI-фрагмент плазмиды pET-22b(+) (Novagen) и фрагмент ДНК размером 1196 пар оснований, содержащий слитый ген, состоящий из следующих структурных элементов: нуклеотидная последовательность, кодирующая шестигистидиновый таг, нуклеотидная последовательность, кодирующая сайт узнавания/расщепления протеазы TEV, и нуклеотидная последовательность гена TSIB_0821, соединенных так, чтобы при их биосинтезе в клетках Е. coli сохранялась непрерывная рамка считывания. Получен штамм Е. coli Rosetta(DE3), трансформированный указанной плазмидой, - продуцент химерного белка, включающего аминокислотную последовательность пролидазы TSIB_0821 слитую на N-конце с шестигистидиновым тагом и сайтом узнавания/расщепления протеазы TEV. Разработан способ выращивания и индукции штамма-продуцента и метод выделения и очистки из полученной биомассы функционально-активной рекомбинантной пролидазы TSIB_0821, включающий следующие технологические процессы: две металлоаффинные хроматографии, гель-фильтрацию, обработку TEV протеазой, диализ, концентрирование. Изобретение позволяет получить рекомбинантную пролидазу, максимально приближенную по структуре к ее природному аналогу с высоким и стабильным выходом, уровнем очистки и функциональной активности. 1. Плазмида pHisTevTSIB0821, определяющая синтез рекомбинантной пролидазы TSIB_0821, характеризующаяся наличием следующих фрагментов: NdeI/SalI-фрагмента, плазмиды pET-22b(+) (Novagen) размером 5365 п.о., NdeI/NcoI-фрагмента, кодирующего шестигистидиновый таг и сайт узнавания/расщепления протеазы TEV (Seq. 1), и NcoI/SalI-фрагмента, содержащего структурную часть гена TSIB_0821, соответствующую открытой рамке считывания 749419-750516 полного геномного сиквенса археи Thermococcus sibiricus MM 739 (gi:242397997), адаптированную по 5'- и 3'-концам сайтами рестриказ Ncol и Sail (Seq. 2), соединенных так, чтобы при их биосинтезе в клетках E.coli сохранялась непрерывная рамка считывания.
2. Штамм Е. coli Rosetta(DE3), трансформированный плазмидой pHisTevTSIB0821 по п.1, - индуцибельный продуцент химерного белка, включающего аминокислотную последовательность пролидазы TSIB_0821, слитую на N-конце с шестигистидиновым тагом и сайтом узнавания/расщепления протеазы TEV.
3. Способ получения рекомбинантной пролидазы TSIB_0821, характеризующийся тем, что после добавления индуктора экспрессии штамм-продуцент по п.2 инкубируют в жидкой питательной среде LB в течение 20 ч при 18°С, затем бактериальные клетки осаждают центрифугированием, суспензию клеток дезинтегрируют в буферном растворе, экстракт центрифугируют, а надосадочную жидкость помещают на колонку с металлоаффинной смолой, с которой после удаления продуктов неспецифического связывания элюируют целевой белок, который инкубируют с протеазой TEV, которую вместе c отщепленной ею аминокислотной последовательностью удаляют повторной металлохелатной хроматографией, далее целевой продукт концентрируют и финально доочищают гель-фильтрацией.
Основное назначение
Изобретение относится к области биотехнологии и генной инженерии и представляет собой рекомбинантную плазмиду pHisTevTSIB0821 для экспрессии в клетках Escherichia coli пролидазы TSIB_0821 из археи Thermococcus sibiricus. Заявленная плазмида включает NdeI/SalI-фрагмент плазмиды pET-22b(+) (Novagen) и фрагмент ДНК размером 1196 пар оснований, содержащий слитый ген, состоящий из следующих структурных элементов: нуклеотидная последовательность, кодирующая шестигистидиновый таг, нуклеотидная последовательность, кодирующая сайт узнавания/расщепления протеазы TEV, и нуклеотидная последовательность гена TSIB_0821, соединенных так, чтобы при их биосинтезе в клетках Е. coli сохранялась непрерывная рамка считывания. Получен штамм Е. coli Rosetta(DE3), трансформированный указанной плазмидой, - продуцент химерного белка, включающего аминокислотную последовательность пролидазы TSIB_0821 слитую на N-конце с шестигистидиновым тагом и сайтом узнавания/расщепления протеазы TEV. Разработан способ выращивания и индукции штамма-продуцента и метод выделения и очистки из полученной биомассы функционально-активной рекомбинантной пролидазы TSIB_0821, включающий следующие технологические процессы: две металлоаффинные хроматографии, гель-фильтрацию, обработку TEV протеазой, диализ, концентрирование. Изобретение позволяет получить рекомбинантную пролидазу, максимально приближенную по структуре к ее природному аналогу с высоким и стабильным выходом, уровнем очистки и функциональной активности. 1. Плазмида pHisTevTSIB0821, определяющая синтез рекомбинантной пролидазы TSIB_0821, характеризующаяся наличием следующих фрагментов: NdeI/SalI-фрагмента, плазмиды pET-22b(+) (Novagen) размером 5365 п.о., NdeI/NcoI-фрагмента, кодирующего шестигистидиновый таг и сайт узнавания/расщепления протеазы TEV (Seq. 1), и NcoI/SalI-фрагмента, содержащего структурную часть гена TSIB_0821, соответствующую открытой рамке считывания 749419-750516 полного геномного сиквенса археи Thermococcus sibiricus MM 739 (gi:242397997), адаптированную по 5'- и 3'-концам сайтами рестриказ Ncol и Sail (Seq. 2), соединенных так, чтобы при их биосинтезе в клетках E.coli сохранялась непрерывная рамка считывания.
2. Штамм Е. coli Rosetta(DE3), трансформированный плазмидой pHisTevTSIB0821 по п.1, - индуцибельный продуцент химерного белка, включающего аминокислотную последовательность пролидазы TSIB_0821, слитую на N-конце с шестигистидиновым тагом и сайтом узнавания/расщепления протеазы TEV.
3. Способ получения рекомбинантной пролидазы TSIB_0821, характеризующийся тем, что после добавления индуктора экспрессии штамм-продуцент по п.2 инкубируют в жидкой питательной среде LB в течение 20 ч при 18°С, затем бактериальные клетки осаждают центрифугированием, суспензию клеток дезинтегрируют в буферном растворе, экстракт центрифугируют, а надосадочную жидкость помещают на колонку с металлоаффинной смолой, с которой после удаления продуктов неспецифического связывания элюируют целевой белок, который инкубируют с протеазой TEV, которую вместе c отщепленной ею аминокислотной последовательностью удаляют повторной металлохелатной хроматографией, далее целевой продукт концентрируют и финально доочищают гель-фильтрацией.
|
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
Основное назначение
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
|
1. Плазмида pHisTevTSIB0821, определяющая синтез рекомбинантной пролидазы TSIB_0821, характеризующаяся наличием следующих фрагментов: NdeI/SalI-фрагмента, плазмиды pET-22b(+) (Novagen) размером 5365 п.о., NdeI/NcoI-фрагмента, кодирующего шестигистидиновый таг и сайт узнавания/расщепления протеазы TEV (Seq. 1), и NcoI/SalI-фрагмента, содержащего структурную часть гена TSIB_0821, соответствующую открытой рамке считывания 749419-750516 полного геномного сиквенса археи Thermococcus sibiricus MM 739 (gi:242397997), адаптированную по 5'- и 3'-концам сайтами рестриказ Ncol и Sail (Seq. 2), соединенных так, чтобы при их биосинтезе в клетках E.coli сохранялась непрерывная рамка считывания.
2. Штамм Е. coli Rosetta(DE3), трансформированный плазмидой pHisTevTSIB0821 по п.1, - индуцибельный продуцент химерного белка, включающего аминокислотную последовательность пролидазы TSIB_0821, слитую на N-конце с шестигистидиновым тагом и сайтом узнавания/расщепления протеазы TEV.
3. Способ получения рекомбинантной пролидазы TSIB_0821, характеризующийся тем, что после добавления индуктора экспрессии штамм-продуцент по п.2 инкубируют в жидкой питательной среде LB в течение 20 ч при 18°С, затем бактериальные клетки осаждают центрифугированием, суспензию клеток дезинтегрируют в буферном растворе, экстракт центрифугируют, а надосадочную жидкость помещают на колонку с металлоаффинной смолой, с которой после удаления продуктов неспецифического связывания элюируют целевой белок, который инкубируют с протеазой TEV, которую вместе c отщепленной ею аминокислотной последовательностью удаляют повторной металлохелатной хроматографией, далее целевой продукт концентрируют и финально доочищают гель-фильтрацией.
Основное назначение
1. Плазмида pHisTevTSIB0821, определяющая синтез рекомбинантной пролидазы TSIB_0821, характеризующаяся наличием следующих фрагментов: NdeI/SalI-фрагмента, плазмиды pET-22b(+) (Novagen) размером 5365 п.о., NdeI/NcoI-фрагмента, кодирующего шестигистидиновый таг и сайт узнавания/расщепления протеазы TEV (Seq. 1), и NcoI/SalI-фрагмента, содержащего структурную часть гена TSIB_0821, соответствующую открытой рамке считывания 749419-750516 полного геномного сиквенса археи Thermococcus sibiricus MM 739 (gi:242397997), адаптированную по 5'- и 3'-концам сайтами рестриказ Ncol и Sail (Seq. 2), соединенных так, чтобы при их биосинтезе в клетках E.coli сохранялась непрерывная рамка считывания.
2. Штамм Е. coli Rosetta(DE3), трансформированный плазмидой pHisTevTSIB0821 по п.1, - индуцибельный продуцент химерного белка, включающего аминокислотную последовательность пролидазы TSIB_0821, слитую на N-конце с шестигистидиновым тагом и сайтом узнавания/расщепления протеазы TEV.
3. Способ получения рекомбинантной пролидазы TSIB_0821, характеризующийся тем, что после добавления индуктора экспрессии штамм-продуцент по п.2 инкубируют в жидкой питательной среде LB в течение 20 ч при 18°С, затем бактериальные клетки осаждают центрифугированием, суспензию клеток дезинтегрируют в буферном растворе, экстракт центрифугируют, а надосадочную жидкость помещают на колонку с металлоаффинной смолой, с которой после удаления продуктов неспецифического связывания элюируют целевой белок, который инкубируют с протеазой TEV, которую вместе c отщепленной ею аминокислотной последовательностью удаляют повторной металлохелатной хроматографией, далее целевой продукт концентрируют и финально доочищают гель-фильтрацией.
|
||