Штаммы микроорганизмов

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу получения гидролазы эфиров альфа-аминокислот путем биосинтеза рекомбинантными бактериями. Для осуществления способа сконструирован рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli ВКПМ В-11271 - продуцент гидролазы эфиров альфа-аминокислот из Xanthomonas rubrilineans ВКПМ В-9915, полученный путем трансформации штамма-реципиента Escherichia coli BL21(DE3) плазмидной ДНК, соответствующей нуклеотидной последовательности SEQ ID NO 1, содержащей ген aehR гидролазы эфиров альфа-аминокислот из Xanthomonas rubrilineans ВКПМ В-9915, не модифицированный на 5?-конце последовательностью, кодирующей полигистидиновый «хвост», и находящийся под контролем промотора Т7, а также ген устойчивости к канамицину Kan. Изобретение позволяет получать гидролазу эфиров альфа-аминокислот с высокой степенью эффективности. 1. Рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli ВКПМ В-11271 - продуцент гидролазы эфиров альфа-аминокислот из Xanthomonas rubrilineans ВКПМ В-9915, полученный путем трансформации штамма- реципиента Escherichia coli BL21 (DE3) плазмидной ДНК, соответствующей нуклеотидной последовательности SEQ ID NO 1, содержащей ген aehR гидролазы эфиров альфа-аминокислот из Xanthomonas rubrilineans ВКПМ В-9915, не модифицированный на 5?-конце последовательностью, кодирующей полигистидиновый «хвост», и находящийся под контролем промотора Т7, а также ген устойчивости к канамицину Каn. 2. Способ микробиологического синтеза гидролазы эфиров альфа-аминокислот, не модифицированной на N-конце полигистидиновой последовательностью, предусматривающий культивирование бактерий, содержащих ген aehR из Xanthomonas rubrilineans ВКПМ В-9915, в подходящей питательной среде, отличающийся тем, что в качестве продуцента используют рекомбинантный штамм по п.1, в состав среды включают канамицин, а экспрессию целевого продукта осуществляют добавлением изопропил-?-D-тиогалактозида в качестве индуктора.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии и генной инженерии и представляет собой рекомбинантную плазмиду pHisTevTSIB0821 для экспрессии в клетках Escherichia coli пролидазы TSIB_0821 из археи Thermococcus sibiricus. Заявленная плазмида включает NdeI/SalI-фрагмент плазмиды pET-22b(+) (Novagen) и фрагмент ДНК размером 1196 пар оснований, содержащий слитый ген, состоящий из следующих структурных элементов: нуклеотидная последовательность, кодирующая шестигистидиновый таг, нуклеотидная последовательность, кодирующая сайт узнавания/расщепления протеазы TEV, и нуклеотидная последовательность гена TSIB_0821, соединенных так, чтобы при их биосинтезе в клетках Е. coli сохранялась непрерывная рамка считывания. Получен штамм Е. coli Rosetta(DE3), трансформированный указанной плазмидой, - продуцент химерного белка, включающего аминокислотную последовательность пролидазы TSIB_0821 слитую на N-конце с шестигистидиновым тагом и сайтом узнавания/расщепления протеазы TEV. Разработан способ выращивания и индукции штамма-продуцента и метод выделения и очистки из полученной биомассы функционально-активной рекомбинантной пролидазы TSIB_0821, включающий следующие технологические процессы: две металлоаффинные хроматографии, гель-фильтрацию, обработку TEV протеазой, диализ, концентрирование. Изобретение позволяет получить рекомбинантную пролидазу, максимально приближенную по структуре к ее природному аналогу с высоким и стабильным выходом, уровнем очистки и функциональной активности. 1. Плазмида pHisTevTSIB0821, определяющая синтез рекомбинантной пролидазы TSIB_0821, характеризующаяся наличием следующих фрагментов: NdeI/SalI-фрагмента, плазмиды pET-22b(+) (Novagen) размером 5365 п.о., NdeI/NcoI-фрагмента, кодирующего шестигистидиновый таг и сайт узнавания/расщепления протеазы TEV (Seq. 1), и NcoI/SalI-фрагмента, содержащего структурную часть гена TSIB_0821, соответствующую открытой рамке считывания 749419-750516 полного геномного сиквенса археи Thermococcus sibiricus MM 739 (gi:242397997), адаптированную по 5'- и 3'-концам сайтами рестриказ Ncol и Sail (Seq. 2), соединенных так, чтобы при их биосинтезе в клетках E.coli сохранялась непрерывная рамка считывания. 2. Штамм Е. coli Rosetta(DE3), трансформированный плазмидой pHisTevTSIB0821 по п.1, - индуцибельный продуцент химерного белка, включающего аминокислотную последовательность пролидазы TSIB_0821, слитую на N-конце с шестигистидиновым тагом и сайтом узнавания/расщепления протеазы TEV. 3. Способ получения рекомбинантной пролидазы TSIB_0821, характеризующийся тем, что после добавления индуктора экспрессии штамм-продуцент по п.2 инкубируют в жидкой питательной среде LB в течение 20 ч при 18°С, затем бактериальные клетки осаждают центрифугированием, суспензию клеток дезинтегрируют в буферном растворе, экстракт центрифугируют, а надосадочную жидкость помещают на колонку с металлоаффинной смолой, с которой после удаления продуктов неспецифического связывания элюируют целевой белок, который инкубируют с протеазой TEV, которую вместе c отщепленной ею аминокислотной последовательностью удаляют повторной металлохелатной хроматографией, далее целевой продукт концентрируют и финально доочищают гель-фильтрацией.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)

Изобретение относится к области биохимии, в частности к рекомбинантному штамму бактерий Rhodococcus rhodochrous ВКПМ Ас1960, обладающему конститутивной ацилирующей активностью и полученному путем замещения в хромосоме штамма Rhodococcus rhodochrous ВКМ Ас-1515Д гена, кодирующего нитрилгидратазу на ген, кодирующий ациламидазу из штамма Rhodococcus erythropolis 37 ВКПМ Ас-1793, а также к способу синтеза N-замещенных акриламидов из акриламида и аминов с его использованием в качестве биокатализатора. Изобретение позволяет эффективно получать концентрированные растворы N-замещенных акриламидов. 1. Рекомбинантный штамм бактерий Rhodococcus rhodochrous ВКПМ Ас1960, обладающий конститутивной ацилирующей активностью и полученный путем замещения в хромосоме штамма Rhodococcus rhodochrous ВКМ Ас-1515Д гена, кодирующего нитрилгидратазу на ген, кодирующий ациламидазу из штамма Rhodococcus erythropolis 37 ВКПМ Ас-1793. 2. Способ синтеза N-замещенных акриламидов из акриламида и аминов с использованием в качестве биокатализатора штамма бактерий по п.1.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен рекомбинантный штамм дрожжей Schizosaccharomyces pombe ВКПМ Y-4041, являющийся продуцентом молочной кислоты. Штамм получен путем трансформации штамма Schizosaccharomyces pombe ВКПМ Y-3106 интегративной плазмидой pcDNA-Km-leu1-pla, сконструированной на основе вектора pUC19 и содержащей ген лактатдегидрогеназы ldh1 молочнокислых бактерий Lactobacillus plantarum. Предложенный штамм при культивировании на среде YPD способен продуцировать молочную кислоту в количестве 50 г/л культуральной жидкости. Рекомбинантный штамм дрожжей Schizosaccharomyces pombe ВКПМ Y-4041 - продуцент молочной кислоты, полученный трансформацией штамма Schizosaccharomyces pombe ВКПМ Y-3106 интегративной плазмидой pcDNA-Km-leu1-pla, сконструированной на основе вектора pUC19 и содержащей ген лактатдегидрогеназы ldh1 молочнокислых бактерий Lactobacillus plantarum.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к штамму - продуценту треонина. Штамм Escherichia coli ВКПМ В-11820 получен путем инактивации у штамма Escherichia coli ВКПМ В-3996 генов poxB и sstT на фоне увеличенной экспрессии гена galP за счет замены его природного промотора на синтетический промотор Ptac3 и увеличенной экспрессии генов оперона thrABC за счет замены его природного промотора на фаговый промотор PA1, удаления последовательности регуляторного пептида thrL и введения десенсибилизирующей мутации thrA433. Полученный штамм позволяет получать L-треонин с высокой эффективностью. Штамм Escherichia coli ВКПМ В-11820 - продуцент аминокислоты L-треонина, полученный путем инактивации у штамма Escherichia coli ВКПМ В-3996 генов poxB и sstT на фоне увеличенной экспрессии гена galP за счет замены его природного промотора на синтетический промотор Ptac3 и увеличенной экспрессии генов оперона thrABC за счет замены его природного промотора на фаговый промотор PA1, удаления последовательности регуляторного пептида thrL и введения десенсибилизирующей мутации thrA433.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Группа изобретений относится к биотехнологии и представляет собой рекомбинантный штамм Escherichia coli ВКПМ В-11864, обладающий конститутивной аспартазной активностью и полученный путем введения в штамм E. coli ВКПМ 7188 плазмиды, содержащей ген aspA под контролем промотора pEftu из Corynebacterium glutamicum АТСС13032. Группа изобретений относится также к способу синтеза L-аспарагиновой кислоты, согласно которому фумарат аммония смешивают с суспензией биокатализатора, причем в качестве биокатализатора используют указанный рекомбинантный штамм. Группа изобретений позволяет получать L-аспарагиновую кислоту с высокой степенью эффективности. 1. Рекомбинантный штамм Escherichia coli ВКПМ В-11864, обладающий конститутивной аспартазной активностью и полученный путем введения в штамм E. coli ВКПМ 7188 плазмиды, содержащей ген aspA под контролем промотора pEftu из Corynebacterium glutamicum АТСС13032. 2. Способ синтеза L-аспарагиновой кислоты, согласно которому фумарат аммония смешивают с суспензией биокатализатора, причем в качестве биокатализатора используют рекомбинантный штамм по п. 1. 3. Способ по п. 2, в котором в качестве биокатализатора используют свободные или иммобилизованные клетки рекомбинантного штамма по п. 1.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Группа изобретений относится к штамму бактерий Escherichia coli FUM1.0, являющемуся продуцентом фумаровой кислоты, и способу получения фумаровой кислоты с использованием данного штамма. Штамм получен путем инактивации генов ackA, pta, poxB, ldhA, adhE, pflB, frdA, frdB, sdhA, sdhB, aceA, асеВ и ptsG и усиления экспрессии генов galP и glk в штамме Escherichia coli K-12 MG1655. Способ получения фумаровой кислоты предусматривает культивирование указанного штамма в подходящих условиях с последующим выделением фумаровой кислоты из культуральной жидкости. Группа изобретений обеспечивает высокую продукцию фумаровой кислоты. Коэффициент конверсии глюкозы в фумаровую кислоту при культивировании предложенного штамма составляет 1,31 моль/моль, что составляет 65,5% от теоретически возможного максимума. 2 1. Штамм бактерий Escherichia coli FUM1.0 - продуцент фумаровой кислоты, полученный путем инактивации генов ackA, pta, poxB, ldhA, adhE, pflB, frdA, frdB, sdhA, sdhB, aceA, асеВ и ptsG, и усиления экспрессии генов galP и glk в штамме Escherichia coli K-12 MG1655. 2. Штамм бактерий Escherichia coli по п. 1, отличающийся тем, что экспрессия генов galP и glk усилена за счет замены в хромосоме штамма нуклеотидных последовательностей природных промоторов, контролирующих экспрессию генов galP и glk, на более сильные промоторы. 3. Способ получения фумаровой кислоты путем культивирования штамма по п. 1 в подходящих условиях с последующим выделением фумаровой кислоты из культуральной жидкости.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Предложены варианты бактерий Escherichia coli, являющихся продуцентами янтарной кислоты. Бактерия Escherichia coli модифицирована таким образом, что гены асkА, pta, рохВ, ldhA, adhE, ptsG в ней инактивированы, экспрессия генов galP и glk усилена, и бактерия обладающий активностью пируват карбоксилазы. Также предложен вариант бактерии Escherichia coli, обладающий инактивированными генами ackA, pta, poxB, ldhA, adhE, ptsG, iclR, усиленной экспрессией генов galP и glk, и активностью пируват карбоксилазы. Также предложен вариант бактерии Escherichia coli, обладающий инактивированными генами ackA, pta, рохВ, ldhA, adhE, ptsG, усиленной экспрессией генов galP и glk, усиленной экспрессией генов асеЕ, aceF и lpdA, и активностью пируват карбоксилазы. Также предложен вариант бактерии Escherichia coli, обладающий инактивированными генами асkА, pta, рохВ, ldhA, adhE, ptsG, iclR, усиленной экспрессией генов galP и glk, усиленной экспрессией генов асеЕ, aceF и lpdA, и активностью пируват карбоксилазы. Также предложен вариант бактерии Escherichia coli, обладающий инактивированными генами асkА, pta, рохВ, IdhA, adhE, ptsG, pflB, усиленной экспрессией генов galP и glk, усиленной экспрессией генов асеЕ, aceF и lpdA, и активностью пируват карбоксилазы. Также предложен вариант бактерии Escherichia coli, обладающий инактивированными генами асkА, pta, рохВ, ldhA, adhE, ptsG, pflB, iclR, усиленной экспрессией генов galP и glk, усиленной экспрессией генов асеЕ, aceF и lpdA, и активностью пируват карбоксилазы. Предложен способ получения янтарной кислоты с использованием указанных вариантов. Группа изобретений обеспечивает увеличение выхода янтарной кислоты. 1. Бактерия Escherichia coli - продуцент янтарной кислоты, модифицированная таким образом, что гены ackА, pta, рохВ, ldhA, adhE, ptsG в ней инактивированы, экспрессия генов galP и glk усилена, и бактерия обладает активностью пируват карбоксилазы. 2. Бактерия по п. 1, отличающаяся тем, что активность пируват карбоксилазы обеспечивается за счет введения в бактерию молекулы ДНК, содержащей ген, кодирующий фермент, обладающий активностью, классифицируемой как К.Ф. 6.4.1.1. 3. Бактерия по п. 1, отличающаяся тем, что экспрессия генов galP и glk усилена за счет замены в хромосоме бактерии нуклеотидных последовательностей природных промоторов, контролирующих экспрессию генов galP и glk, на более сильные промоторы. 4. Бактерия Escherichia coli - продуцент янтарной кислоты, модифицированная таким образом, что гены ackA, pta, poxB, IdhA, adhE, ptsG, iclR в ней инактивированы, экспрессия генов galP и glk усилена, и бактерия обладает активностью пируват карбоксилазы. 5. Бактерия по п. 4, отличающаяся тем, что активность пируват карбоксилазы обеспечивается за счет введения в бактерию молекулы ДНК, содержащей ген, кодирующий фермент, обладающий активностью, классифицируемой как К.Ф. 6.4.1.1. 6. Бактерия по п. 4, отличающаяся тем, что экспрессия генов galP и glk усилена за счет замены в хромосоме бактерии нуклеотидных последовательностей природных промоторов, контролирующих экспрессию генов galP и glk, на более сильные промоторы. 7. Бактерия Escherichia coli - продуцент янтарной кислоты, модифицированная таким образом, что гены аскА, pta, рохВ, ldhA, adhE, ptsG в ней инактивированы, экспрессия генов galP и glk усилена, экспрессия генов асеЕ, aceF и lpdA усилена, и бактерия обладает активностью пируват карбоксилазы. 8. Бактерия по п. 7, отличающаяся тем, что активность пируват карбоксилазы обеспечивается за счет введения в бактерию молекулы ДНК, содержащей ген, кодирующий фермент, обладающий активностью, классифицируемой как К.Ф. 6.4.1.1. 9. Бактерия по п. 7, отличающаяся тем, что экспрессия генов galP и glk, а также генов асеЕ, aceF и lpdA усилена за счет замены в хромосоме бактерии нуклеотидных последовательностей природных промоторов, контролирующих экспрессию генов galP и glk, а также генов оперона aceEF-lpdA, на более сильные промоторы. 10. Бактерия Escherichia coli - продуцент янтарной кислоты, модифицированная таким образом, что гены ackA, pta, poxB, ldhA, adhE, ptsG, iclR в ней инактивированы, экспрессия генов galP и glk усилена, экспрессия генов асеЕ, aceF и lpdA усилена, и бактерия обладает активностью пируват карбоксилазы. 11. Бактерия по п. 10, отличающаяся тем, что активность пируват карбоксилазы обеспечивается за счет введения в клетки бактерии молекулы ДНК, содержащей ген, кодирующий фермент, обладающий активностью, классифицируемой как К.Ф. 6.4.1.1. 12. Бактерия по п. 10, отличающаяся тем, что экспрессия генов galP и glk, а также генов асеЕ, aceF и lpdA усилена за счет замены в хромосоме бактерии нуклеотидных последовательностей природных промоторов, контролирующих экспрессию генов galP и glk, а также генов оперона aceEF-lpdA, на более сильные промоторы. 13. Бактерия Escherichia coli - продуцент янтарной кислоты, модифицированная таким образом, что гены ackA, pta, poxB, ldhA, adhE, ptsG, pflB в ней инактивированы, экспрессия генов galP и glk усилена, экспрессия генов асеЕ, aceF и lpdA усилена, и бактерия обладает активностью пируват карбоксилазы. 14. Бактерия по п. 13, отличающаяся тем, что активность пируват карбоксилазы обеспечивается за счет введения в бактерию молекулы ДНК, содержащей ген, кодирующий фермент, обладающий активностью, классифицируемой как К.Ф. 6.4.1.1. 15. Бактерия по п. 13, отличающаяся тем, что экспрессия генов galP и glk, а также генов асеЕ, aceF и lpdA усилена за счет замены в хромосоме бактерии нуклеотидных последовательностей природных промоторов, контролирующих экспрессию генов galP и glk, а также генов оперона aceEF-lpdA, на более сильные промоторы. 16. Бактерия Escherichia coli - продуцент янтарной кислоты, модифицированная таким образом, что гены ackА, pta, рохВ, ldhA, adhE, ptsG, pflB, iclR в ней инактивированы, экспрессия генов galP и glk усилена, экспрессия генов асеЕ, aceF и lpdA усилена, и бактерия обладает активностью пируват карбоксилазы. 17. Бактерия по п. 16, отличающаяся тем, что активность пируват карбоксилазы обеспечивается за счет введения в бактерию молекулы ДНК, содержащей ген, кодирующий фермент, обладающий активностью, классифицируемой как К.Ф. 6.4.1.1. 18. Бактерия по п. 16, отличающаяся тем, что экспрессия генов galP и glk, а также генов асеЕ, aceF и lpdA усилена за счет замены в хромосоме бактерии нуклеотидных последовательностей природных промоторов, контролирующих экспрессию генов galP и glk, а также генов оперона aceEF-lpdA, на более сильные промоторы. 19. Способ получения янтарной кислоты путем культивирования бактерии по п. 1, или 4, или 7, или 10, или 13, или 16 в питательной среде и выделения янтарной кислоты из культуральной жидкости.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретения относятся к биотехнологии и могут быть использованы для производства масляной кислоты. Штамм анаэробных бактерий Clostridium tyrobutyricum, синтезирующий масляную кислоту с высокой селективностью (до 100%) и устойчивый к ее концентрации до 2,0 об. % в жидкой среде, депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ В-12465. Предложен способ микробиологического синтеза масляной кислоты, предусматривающий культивирование штамма С. tyrobutyricum ВКПМ В-12465 в анаэробных условиях в питательной среде, включающей источники углерода, азота и минеральные добавки. В качестве источника углерода питательная среда содержит 60 г/л глюкозы и 3 г/л ацетата аммония. Изобретения обеспечивают максимальное накопление масляной кислоты 27 г/л в культуральной жидкости без побочных продуктов. 1. Штамм анаэробных бактерий Clostridium tyrobutyricum ВКПМ В-12465 - продуцент масляной кислоты. 2. Способ микробиологического синтеза масляной кислоты, предусматривающий культивирование мутантного штамма анаэробных бактерий С. tyrobutyricum в анаэробных условиях в питательной среде, включающей источники углерода, азота и минеральные добавки, до максимального накопления целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве штамма-продуцента используют штамм по п. 1, а в качестве источника углерода 60 г/л глюкозы и 3 г/л ацетата аммония.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к области биохимии, генной инженерии и биотехнологии, в частности к штамму Pichia pastoris ВКПМ Y-4269. Настоящий штамм является продуцентом секретируемой термостабильной ксилоглюканазы класса GH74. Указанная ксилоглюканаза кодируется синтетическим геном, соответствующим SEQ ID NO 1. Настоящее изобретение относится также к способу микробиологического синтеза ксилоглюканазы. Указанный способ предусматривает культивирование рекомбинантных микроорганизмов, содержащих ген ксилоглюканазы, в аэробных условиях в питательной среде до максимального накопления целевого продукта. Данная питательная среда включает источники углерода, азота и минеральные добавки. Указанный способ отличается тем, что в качестве продуцента используется рекомбинантный штамм Pichia pastoris ВКПМ Y-4269. Настоящее изобретение позволяет получать секретируемую термостабильную ксилоглюканазу класса GH74 с высоким выходом и чистотой. 1. Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-4269 - продуцент секретируемой термостабильной ксилоглюканазы класса GH74, кодируемой синтетическим геном, соответствующим SEQ ID NO 1. 2. Способ микробиологического синтеза ксилоглюканазы, предусматривающий культивирование рекомбинантных микроорганизмов, содержащих ген ксилоглюканазы, в аэробных условиях в питательной среде, включающей источники углерода, азота и минеральные добавки до максимального накопления целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве продуцента используют рекомбинантный штамм по п. 1.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)