+7 499 196 95 39
11
2854312
Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложена рекомбинантная мутантная ксилоглюканаза AsCeGH12b-m2, имеющая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, которая соответствует аминокислотной последовательности ксилоглюканазы семейства 12 из Aspergillus cervinus ВКПМ F-612 с заменой природного остатка лейцина в положении 18 остатком изолейцина и остатка тирозина в положении 37 остатком валина, обеспечивающим повышение термостабильности модифицированного фермента по сравнению с ферментом дикого типа. Также предложен рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-5262 - продуцент секретируемой ксилоглюканазы AsCeGH12b-m2, имеющей SEQ ID NO: 1 и кодируемой геном AsCeGH12b-m2, имеющим SEQ ID NO: 2. Разработан способ микробиологического синтеза ксилоглюканазы AsCeGH12b-m2, предусматривающий культивирование указанного штамма в аэробных условиях в подходящей питательной среде. Изобретение обеспечивает высокий уровень продукции ксилоглюканазы AsCeGH12b-m2 с повышенной термостабильностью, а также эффективное снижение вязкости растворов ксилоглюкана.
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
Рекомбинантная мутантная ксилоглюканаза AsCeGH12b-m2, имеющая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, которая соответствует аминокислотной последовательности ксилоглюканазы семейства 12 из Aspergillus cervinus ВКПМ F-612 с заменой природного остатка лейцина в положении 18 остатком изолейцина и остатка тирозина в положении 37 остатком валина, обеспечивающим повышение термостабильности модифицированного фермента по сравнению с ферментом дикого типа. 2. Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-5262 - продуцент секретируемой ксилоглюканазы AsCeGH12b-m2 по п. 1, имеющей SEQ ID NO: 1 и кодируемой геном AsCeGH12b-m2, имеющим SEQ ID NO: 2. 3. Способ микробиологического синтеза рекомбинантной мутантной ксилоглюканазы AsCeGH12b-m2 по п. 1, предусматривающий культивирование рекомбинантного штамма Pichia pastoris по п. 2 в аэробных условиях в подходящей питательной среде.
12
Патент 2756331
Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложена рекомбинантная секретируемая термостабильная ?-глюканаза, включающая последовательность кодирующей части гена ?-глюканазы семейства 12 из штамма Thielavia terrestris ВКПМ F-144 и имеющая последовательность SEQ ID NO 2. Также предложен рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-4850, продуцирующий вышеуказанную ?-глюканазу и полученный путем введения кодирующей части гена ?-глюканазы из штамма Thielavia terrestris ВКПМ F-144, соответствующей последовательности SEQ ID NO 1 в штамм-реципиент Pichia pastoris Х33 в составе плазмиды pPIC-ThiTeEgh12. Также предложен способ микробиологического синтеза вышеуказанной ?-глюканазы, предусматривающий культивирование штамма Pichia pastoris ВКПМ Y-4850 в аэробных условиях в подходящей питательной среде с периодическим добавлением в качестве индуктора метанола до максимального накопления целевого продукта. Группа изобретений обеспечивает расширение арсенала рекомбинантных ?-глюканаз, штаммов-продуцентов и способов микробиологического синтеза рекомбинантных ?-глюканаз. 1. Рекомбинантная секретируемая термостабильная ?-глюканаза, включающая последовательность кодирующей части гена ?-глюканазы семейства 12 из штамма Thielavia terrestris ВКПМ F-144 и имеющая последовательность SEQ ID NO 2. 2. Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-4850 - продуцент ?-глюканазы по п. 1, полученный путем введения кодирующей части гена ?-глюканазы из штамма Thielavia terrestris ВКПМ F-144, соответствующей последовательности SEQ ID NO 1 в штамм-реципиент Pichia pastoris Х33 в составе плазмиды pPIC-ThiTeEgh12. 3. Способ микробиологического синтеза ?-глюканазы по п. 1 путем культивирования штамма дрожжей Pichia pastoris по п. 2 в аэробных условиях в подходящей питательной среде с периодическим добавлением в качестве индуктора метанола до максимального накопления целевого продукта.
Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)
1. Рекомбинантная секретируемая термостабильная ?-глюканаза, включающая последовательность кодирующей части гена ?-глюканазы семейства 12 из штамма Thielavia terrestris ВКПМ F-144 и имеющая последовательность SEQ ID NO 2. 2. Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-4850 - продуцент ?-глюканазы по п. 1, полученный путем введения кодирующей части гена ?-глюканазы из штамма Thielavia terrestris ВКПМ F-144, соответствующей последовательности SEQ ID NO 1 в штамм-реципиент Pichia pastoris Х33 в составе плазмиды pPIC-ThiTeEgh12. 3. Способ микробиологического синтеза ?-глюканазы по п. 1 путем культивирования штамма дрожжей Pichia pastoris по п. 2 в аэробных условиях в подходящей питательной среде с периодическим добавлением в качестве индуктора метанола до максимального накопления целевого продукта.
13
2528056
Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены варианты рекомбинантных штаммов бактерий Escherichia coli, являющихся продуцентами янтарной кислоты и содержащих ген, кодирующий пируваткарбоксилазу. Штамм бактерий Escherichia coli SGM1.0 [pPYC] обладает инактивированными генами ackA, pta, poxB, ldhA, adhE. Штамм бактерий Escherichia coli SGM1.1 [pPYC] обладает инактивированными генами ackA, pta, poxB, ldhA, adhE и iclR. Штамм бактерий Escherichia coli SGM2.0 [pPYC] обладает инактивированными генами ackA, pta, poxB, ldhA, adhE и усиленной экспрессией генов асеЕ, aceF и lpdA. Штамм бактерий Escherichia coli SGM2.1 [pPYC] обладает инактивированными генами ackA, pta, poxB, ldhA, adhE, iclR и усиленной экспрессией генов асеЕ, aceF и lpdA. Штамм бактерий Escherichia coli SGM3.0 [pPYC] обладает инактивированными генами ackA, pta, рохВ, ldhA, adhE, pflB и усиленной экспрессией генов асеЕ, aceF и lpdA. Штамм бактерий Escherichia coli SGM3.1 [pPYC] обладает инактивированными генами ackA, pta, рохВ, ldhA, adhE, pflB, iclR и усиленной экспрессией генов асеЕ, aceF и lpdA. Предложен также способ получения янтарной кислоты с использованием указанных штаммов. Группа изобретений обеспечивает увеличение выхода янтарной кислоты.
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
1. Рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli SGM1.0 [pPYC] - продуцент янтарной кислоты, обладающий инактивированными генами ackA, pta, poxB, ldhA, adhE и активностью пируваткарбоксилазы. 2. Рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli по п.1, отличающийся тем, что активность пируваткарбоксилазы обеспечивается за счет введения в клетки штамма молекулы ДНК, содержащей ген, кодирующий фермент, обладающий активностью, классифицируемой как К.Ф. 6.4.1.1. 3. Рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli SGM1.1 [pPYC] - продуцент янтарной кислоты, обладающий инактивированными генами ackA, pta, poxB, ldhA, adhE, iclR и активностью пируваткарбоксилазы. 4. Рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli по п.3, отличающийся тем, что активность пируваткарбоксилазы обеспечивается за счет введения в клетки штамма молекулы ДНК, содержащей ген, кодирующий фермент, обладающий активностью, классифицируемой как К.Ф. 6.4.1.1. 5. Рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli SGM2.0 [pPYC] - продуцент янтарной кислоты, обладающий инактивированными генами ackA, pta, poxB, ldhA, adhE, усиленной экспрессией генов асеЕ, aceF, lpdA и активностью пируваткарбоксилазы. 6. Рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli по п.5, отличающийся тем, что активность пируваткарбоксилазы обеспечивается за счет введения в клетки штамма молекулы ДНК, содержащей ген, кодирующий фермент, обладающий активностью, классифицируемой как К.Ф. 6.4.1.1. 7. Рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli по п.5, отличающийся тем, что экспрессия генов асеЕ, aceF и lpdA усилена за счет замены в хромосоме штамма нуклеотидной последовательности природного промотора, контролирующего экспрессию генов aceEF-lpdA оперона, на более сильный промотор.
14
Патент 2642260
Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены рекомбинантный модифицированный глюкагоноподобный пептид-1 человека (рмГПП-1), способ его получения и штамм-продуцент E.coli ВКПМ В-12555. рмГПП-1 имеет последовательность SEQ ID NO 1. рмГПП-1 получают путем культивирования рекомбинантного штамма-продуцента E.coli ВКПМ В-12555 для получения предшественника пептида рмГПП-1 с последующим выделением полученного предшественника, его автокаталитическим расщеплением и очисткой целевого полипептида. На мышиной модели показано, что при подкожном или внутримышечном применении рмГПП-1 имеет показатели сахаропонижающей активности и продолжительности действия, сходные с показателями коммерческого препарата «Ликсумия», получаемого с использованием химического синтеза, и на протяжении минимум 3 ч после введения способен эффективно снижать уровень глюкозы в крови практически в два раза по сравнению с контролем. Штамм E. coli ВКПМ В-12555 позволяет осуществлять биосинтез предшественника рмГПП-1 на уровне 40% от суммарного белка клеток, что соответствует биосинтезу рмГПП-1 на уровне 13% от суммарного белка клеток. 1. Рекомбинантный глюкагоноподобный пептид-1 человека для понижения уровня сахара в крови, имеющий последовательность SEQ ID NO 1. 2. Рекомбинантный штамм-продуцент Escherichia coli ВКПМ В-12555, используемый для получения пептида по п. 1 и являющийся продуцентом предшественника пептида по п. 1. 3. Способ получения рекомбинантного глюкагоноподобного пептида-1 человека по п. 1 путем культивирования рекомбинантного штамма-продуцента по п. 2 для получения предшественника пептида по п. 1 с последующим выделением полученного предшественника, его автокаталитическим расщеплением и очисткой целевого полипептида.
Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)
1. Рекомбинантный глюкагоноподобный пептид-1 человека для понижения уровня сахара в крови, имеющий последовательность SEQ ID NO 1. 2. Рекомбинантный штамм-продуцент Escherichia coli ВКПМ В-12555, используемый для получения пептида по п. 1 и являющийся продуцентом предшественника пептида по п. 1. 3. Способ получения рекомбинантного глюкагоноподобного пептида-1 человека по п. 1 путем культивирования рекомбинантного штамма-продуцента по п. 2 для получения предшественника пептида по п. 1 с последующим выделением полученного предшественника, его автокаталитическим расщеплением и очисткой целевого полипептида.
15
2522804
Группа изобретений относится к биотехнологии. Сконструированы рекомбинантные Штаммы микроорганизмов Rhodococcus erythropolis 37 p16-Ami ВКПМ Ac-1937 и Rhodococcus erythropolis HX7 p16-Ami ВКПМ Ac-1938, конститутивно продуцирующие фермент ациламидазу с ацилирующей активностью. Также разработан способ синтеза N-замещенных акриламидов, в частности N-изопропилакриламида и N-диметиламинопропилакриламида, с использованием этих штаммов в качестве биокатализатора. Заявленные изобретения позволяют повысить эффективность получения N-замещенных акриламидов
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
1. Рекомбинантный штамм Rhodococcus erythropolis ВКПМ Ас-1937, обладающий конститутивной ацилирующей активностью и полученный введением кодирующего ациламидазу фрагмента ДНК DAA37 из штамма Rhodococcus erythropolis ВКПМ Ас-1 и регуляторной области гена нитрилгидратазы из штамма Rhodococcus erythropolis М8 в реципиентный штамм Rhodococcus erythropolis ВКПМ Ас-1793. 2. Рекомбинантный штамм Rhodococcus erythropolis ВКПМ Ac-1938, обладающий конститутивной ацилирующей активностью и полученный введением кодирующего ациламидазу фрагмента ДНК DAA37 из штамма Rhodococcus erythropolis ВКПМ Ас-1 и регуляторной области гена нитрилгидратазы из штамма Rhodococcus erythropolis М8 в реципиентный штамм Rhodococcus erythropolis ВКПМ Ас-1267. 3. Способ синтеза N-замещенных акриламидов путем смешивания водных растворов акриламида и алифатического первичного амина с добавлением в качестве биокатализатора бактерий Rhodococcus erythropolis, обладающих ацилирующей активностью, отличающийся тем, что в качестве биокатализатора используют клетки рекомбинантного штамма по п.1 или 2.
16
Патент 2631922
Группа изобретений относится к микробиологической промышленности. Заявлены штамм дрожжей Yarrowia lipolytica Y-3753ch и штамм дрожжей Yarrowia lipolytica Y4215Leu+, обладающие способностью продуцировать янтарную кислоту. Штаммы микроорганизмов дрожжей Yarrowia lipolytica депонированы во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационными номерами ВКПМ Y-4215 и ВКПМ Y-4297 соответственно. Заявленные Штаммы микроорганизмов могут быть использованы для получения чистой янтарной кислоты. Изобретение позволяет получить чистую янтарную кислоту. 1. Штамм дрожжей Yarrowia lipolytica ВКПМ У-4215 - продуцент янтарной кислоты. 2. Штамм дрожжей Yarrowia lipolytica ВКПМ У-4297 - продуцент янтарной кислоты.
Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)
1. Штамм дрожжей Yarrowia lipolytica ВКПМ У-4215 - продуцент янтарной кислоты. 2. Штамм дрожжей Yarrowia lipolytica ВКПМ У-4297 - продуцент янтарной кислоты.
17
2489481
Группа изобретений относится к области биотехнологии. Культивируют микроорганизм-продуцент в подходящей питательной среде с последующим выделением и очисткой целевого белка. При этом в качестве продуцента используют дрожжи Saccharomyces cerevisiae, трансформированные вектором экспрессии, который содержит область инициации репликации эндогенной 2-мкм плазмиды дрожжей Saccharomyces cerevisiae, а также промотор GAL1 дрожжей, контролирующий экспрессию гена, включающего последовательность ДНК SEQ ID NO:1, кодирующую слитый белок, составными частями которого являются аминокислотные последовательности белка E7-PISP70 и белка убиквитина дрожжей Saccharomyces cerevisiae, занимающего в составе слитого белка N-концевое положение, заканчивающегося сайтом процессинга, отделяющим его от последовательности белка E7-HSP70 и распознаваемым природными убиквитин-специфичными протеиназами дрожжей. Штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-3853 - продуцент белка E7-HSP70 - получают путем трансформации вектором экспрессии pPDX3U-E7-HSP70 штамма дрожжей Saccharomyces cerevisiae D702. Группа изобретений обеспечивает высокий уровень биосинтеза и выход очищенного белка E7-HSP70, получение водорастворимого корректно процессированного белка E7-HSP70, принципиальное отсутствие в препаратах белка E7-HSP70 токсичного и пирогенного ЛПС бактерий
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)
1. Способ получения белка E7-HSP70 путем культивирования микроорганизма-продуцента в подходящей питательной среде с последующим выделением и очисткой целевого белка, отличающийся тем, что в качестве продуцента используют дрожжи Saccharomyces cerevisiae, трансформированные вектором экспрессии, который содержит область инициации репликации эндогенной 2-мкм плазмиды дрожжей Saccharomyces cerevisiae, а также промотор GAL1 дрожжей, контролирующий экспрессию гена, включающего последовательность ДНК SEQ ID NO:1, кодирующую слитый белок, составными частями которого являются аминокислотные последовательности белка E7-HSP70 и белка убиквитина дрожжей Saccharomyces cerevisiae, занимающего в составе слитого белка N-концевое положение, заканчивающегося сайтом процессинга, отделяющим его от последовательности белка E7-HSP70 и распознаваемым природными убиквитин-специфичными протеиназами дрожжей. 2. Штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-3853 - продуцент белка E7-HSP70 для осуществления способа по п.1, полученный путем трансформации вектором экспрессии pPDX3U-E7-HSP70 штамма дрожжей Saccharomyces cerevisiae D702
18
Патент 2639248
Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-4299 – продуцент секретируемой ксилоглюканазы, кодируемой геном AsCeGH12b (SEQ ID NO: 1), клонированным из Aspergillus cervinus ВКПМ F-612. Предложен способ микробиологического синтеза ксилоглюканазы, кодируемой указанным геном, путем культивирования указанного рекомбинантного штамма в аэробных условиях в подходящей питательной среде до максимального накопления целевого продукта. Группа изобретений позволяет получать термостабильную ксилоглюканазу семейства GH12, с оптимумом активности при 55°C, рН 5.0, в количестве не менее 30 единиц на 1 мл культуральной жидкости. 1. Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-4299 - продуцент секретируемой ксилоглюканазы, кодируемой геном, соответствующим последовательности SEQ ID NO 1. 2. Способ микробиологического синтеза ксилоглюканазы, путем культивирования рекомбинантного штамма дрожжей Pichia pastoris, содержащего ген ксилоглюканазы, в аэробных условиях в подходящей питательной среде до максимального накопления целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве продуцента используют рекомбинантный штамм по п.1, а целевым продуктом является ксилоглюканаза, соответствующая последовательности SEQ ID NO 2.
Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)
1. Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-4299 - продуцент секретируемой ксилоглюканазы, кодируемой геном, соответствующим последовательности SEQ ID NO 1. 2. Способ микробиологического синтеза ксилоглюканазы, путем культивирования рекомбинантного штамма дрожжей Pichia pastoris, содержащего ген ксилоглюканазы, в аэробных условиях в подходящей питательной среде до максимального накопления целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве продуцента используют рекомбинантный штамм по п.1, а целевым продуктом является ксилоглюканаза, соответствующая последовательности SEQ ID NO 2.
19
Патент 2620942
Группа изобретений относится к области биотехнологии. Представлен бесплазмидный рекомбинантный штамм Escherichia coli, обладающий конститутивной аспартазной активностью и полученный путем замены промотора гена aspA в штамме Escherichia coli MG1655 на промотор pG25 бактериофага Т5. Представлен способ синтеза L-аспарагиновой кислоты из фумарата аммония с использованием в качестве биокатализатора указанного рекомбинантного штамма в виде или свободных, или иммобилизованных клеток. Группа изобретений обеспечивает более эффективное получение L-аспарагиновой кислоты и позволяет сократить время ее получения в 3-4 раза за счет более высокой аспартазной активности биокатализатора. 1. Бесплазмидный рекомбинантный штамм Escherichia coli, обладающий конститутивной аспартазной активностью и полученный путем замены промотора гена aspA в штамме Escherichia coli MG1655 на промотор pG25 бактериофага Т5. 2. Способ синтеза L-аспарагиновой кислоты из фумарата аммония с использованием в качестве биокатализатора рекомбинантного штамма по п.1 в виде или свободных, или иммобилизованных клеток.
Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)
1. Бесплазмидный рекомбинантный штамм Escherichia coli, обладающий конститутивной аспартазной активностью и полученный путем замены промотора гена aspA в штамме Escherichia coli MG1655 на промотор pG25 бактериофага Т5. 2. Способ синтеза L-аспарагиновой кислоты из фумарата аммония с использованием в качестве биокатализатора рекомбинантного штамма по п.1 в виде или свободных, или иммобилизованных клеток.
20
Патент 2573936
Группа изобретений относится к штамму бактерий Escherichia coli FUM1.0, являющемуся продуцентом фумаровой кислоты, и способу получения фумаровой кислоты с использованием данного штамма. Штамм получен путем инактивации генов ackA, pta, poxB, ldhA, adhE, pflB, frdA, frdB, sdhA, sdhB, aceA, асеВ и ptsG и усиления экспрессии генов galP и glk в штамме Escherichia coli K-12 MG1655. Способ получения фумаровой кислоты предусматривает культивирование указанного штамма в подходящих условиях с последующим выделением фумаровой кислоты из культуральной жидкости. Группа изобретений обеспечивает высокую продукцию фумаровой кислоты. Коэффициент конверсии глюкозы в фумаровую кислоту при культивировании предложенного штамма составляет 1,31 моль/моль, что составляет 65,5% от теоретически возможного максимума. 2 1. Штамм бактерий Escherichia coli FUM1.0 - продуцент фумаровой кислоты, полученный путем инактивации генов ackA, pta, poxB, ldhA, adhE, pflB, frdA, frdB, sdhA, sdhB, aceA, асеВ и ptsG, и усиления экспрессии генов galP и glk в штамме Escherichia coli K-12 MG1655. 2. Штамм бактерий Escherichia coli по п. 1, отличающийся тем, что экспрессия генов galP и glk усилена за счет замены в хромосоме штамма нуклеотидных последовательностей природных промоторов, контролирующих экспрессию генов galP и glk, на более сильные промоторы. 3. Способ получения фумаровой кислоты путем культивирования штамма по п. 1 в подходящих условиях с последующим выделением фумаровой кислоты из культуральной жидкости.
Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)
1. Штамм бактерий Escherichia coli FUM1.0 - продуцент фумаровой кислоты, полученный путем инактивации генов ackA, pta, poxB, ldhA, adhE, pflB, frdA, frdB, sdhA, sdhB, aceA, асеВ и ptsG, и усиления экспрессии генов galP и glk в штамме Escherichia coli K-12 MG1655. 2. Штамм бактерий Escherichia coli по п. 1, отличающийся тем, что экспрессия генов galP и glk усилена за счет замены в хромосоме штамма нуклеотидных последовательностей природных промоторов, контролирующих экспрессию генов galP и glk, на более сильные промоторы. 3. Способ получения фумаровой кислоты путем культивирования штамма по п. 1 в подходящих условиях с последующим выделением фумаровой кислоты из культуральной жидкости.