"Изобретение относится к области биохимии, клеточной биологии, фармакологии, медицины, и касается разработки способа тестирования фармакологических веществ на ингибирование ими фермента поли(АДФ-рибоза)-полимеразы (ПАРП), являющегося мишенью для противораковой терапии и рассматриваемого в качестве перспективной мишени для лечения сердечно-сосудистых, неврологических, нейродегенеративных, инфекционных, иммунных, легочных, эндокринных и других заболеваний. Способ включает: приготовление в многолуночных пластиковых планшетах культур клеток, содержащих ПАРП человека; необратимую пермеабилизацию клеток в результате обработки клеток агентами, вызывающими формирование пор во внешней плазматической мембране; обработку пермеабилизованных клеток ДНК-повреждающими агентами, способствующими формированию комплекса ПАРП-ДНК; преинкубацию пермеабилизованных клеток с тестируемым фармакологическим веществом; инкубацию пермеабилизованных клеток в реакционной смеси, содержащей тестируемое фармакологическое вещество и субстрат ПАРП - никотинамидадениндинуклеотид (НАД) или синтетическое производное НАД+; количественный анализ продуктов реакции поли(АДФ-рибозил)ирования, определение остаточной активности ПАРП (Аост). При Аост ≤ 75% делают вывод о наличии у тестируемого фармакологического вещества ПАРП-ингибиторной активности. Способ обеспечивает высокую чувствительность метода, низкую вариабельность показателей активности ПАРП между независимыми образцами (сестринскими культурами) в одном эксперименте и хорошую воспроизводимость результатов. 7 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 пр.
"
"