Изобретения

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой трансформант дрожжей Komagataella kurtzmanii, продуцирующий эндо-?-1,3(4)-D-глюканазу из Bacillus pumilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 96%, а именно эндо-?-1,3(4)-D-глюканазу из Bacillus safensis, или Bacillus stratosphericus, или Bacillus altitudinis, или Bacillus aerius, или Bacillus cellulasensis, или Bacillus australimaris. Изобретение позволяет получать эндо-?-1,3(4)-D-глюканазу с высокой степенью эффективности. 1. Трансформант дрожжей Komagataella kurtzmanii, продуцирующий ?-глюканазу, содержащий ген bgl, кодирующий эндо-?-l,3(4)-D-глюканазу из Bacillus pumilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична эндо-?-l,3(4)-D-глюканазе из Bacillus pumilus не менее чем на 96%. 2. Трансформант по п. 1, в котором в качестве фермента, аминокислотная последовательность которого гомологична эндо-?-l,3(4)-D-глюканазе из Bacillus pumilus не менее чем на 96%, используют эндо-?-l,3(4)-D-глюканазу из Bacillus safensis, или эндо-?-l,3(4)-D-глюканазу из Bacillus stratosphericus, или эндо-?-l,3(4)-D-глюканазу из Bacillus altitudinis, или эндо-?-l,3(4)-D-глюканазу из Bacillus aerius, или эндо-?-l,3(4)-D-глюканазу из Bacillus cellulasensis, или эндо-?-l,3(4)-D-глюканазу из Bacillus australimaris.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения гетерогенного биокатализатора на основе гидролазы эфиров альфа-аминокислот (AEH) из рекомбинантных бактерий Escherichia coli, несущих ген aehR из Xanthomonas rubrilineans. Для осуществления способа указанные рекомбинантные бактерии культивируют в подходящих условиях, затем разрушают клетки биомассы методом гомогенизации высокого давления для получения гомогената. После чего проводят иммобилизацию содержащейся в гомогенате гидролазы эфиров альфа-аминокислот путем формирования ферментных агрегатов под действием осадителя - сульфата аммония или полиэтиленгликоля - с последующей стадией сшивки этих агрегатов глутаровым альдегидом в присутствии водорастворимого производного аминополисахарида хитозана. Полученные гетерогенные биокатализаторы используют для ферментативного синтеза аминобета-лактамных антибиотиков, например цефалексина, цефпрозила, цефаклора, ампициллина, амоксициллина, путем ацилирования ключевых бета-лактамных соединений соответствующими производными эфира D-аминофенилуксусной кислоты. Настоящее изобретение позволяет получить гетерогенные биокатализаторы с повышенной синтетазной активностью. 1. Способ получения гетерогенного биокатализатора на основе гидролазы эфиров альфа-аминокислот из бактерий, несущих ген aehR из Xanthomonas rubrilineans, включающий получение биомассы штамма бактерий, содержащих ген aehR из Xanthomonas rubrilineans путем культивирования этого штамма в подходящих условиях, разрушения клеток биомассы для получения гомогената с последующей иммобилизацией содержащейся в гомогенате гидролазы эфиров альфа-аминокислот путем формирования ферментных агрегатов под действием осадителя и последующей поперечной сшивки этих агрегатов глутаровым альдегидом, отличающийся тем, что для получения биомассы используют рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli, несущий ген aehR из Xanthomonas rubrilineans; получение гомогената осуществляют путем разрушения клеток полученной биомассы методом гомогенизации высокого давления; формирование ферментных агрегатов непосредственно из полученного гомогената под действием осадителя: сульфата аммония или полиэтиленгликоля, а также последующую поперечную сшивку агрегатов глутаровым альдегидом проводят в присутствии водорастворимого производного аминополисахарида хитозана. 2. Гетерогенный биокатализатор на основе гидролазы эфиров альфа-аминокислот из бактерий, несущих ген aehR из Xanthomonas rubrilineans, полученный способом по п.1 из рекомбинантного штамма бактерий Escherichia coli ВКПМ В-11271. 3. Гетерогенный биокатализатор на основе гидролазы эфиров альфа-аминокислот из бактерий, несущих ген aehR из Xanthomonas rubrilineans, полученный способом по п.1 из рекомбинантного штамма бактерий Escherichia coli ВКПМ В-11246. 4. Способ синтеза аминобета-лактамного антибиотика путем ацилирования ключевого бета-лактамного соединения соответствующим производным эфира D-аминофенилуксусной кислоты, под действием гетерогенного биокатализатора на основе гидролазы эфиров альфа-аминокислот из бактерий, несущих ген aehR Xanthomonas rubrilineans, отличающийся тем, что для осуществления синтеза используют гетерогенный биокатализатор, полученный способом по п.1.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и может применяться в коммунальном (водоподготовка и водоотведение) и сельском хозяйстве, горнодобывающей промышленности, медицине, биотехнологическом производстве. Предложен способ флокуляции биомассы микроводорослей из суспендирующей среды. Способ заключается в последовательном добавлении в суспендирующую среду с биомассой микроводорослей коагулянта шестиводного хлорида железа (III) в концентрации 20-40 мг/л и флокулянтов: полиакриламида и полиэтиленоксида в количестве, соответственно, 2-5 мг/л и 1-4 мг/л. Флокуляцию биомассы микроводорослей проводят при перемешивании при температуре 10°С-40°С. Изобретение обеспечивает увеличение скорости осаждения биомассы микроводорослей. 1. Способ флокуляции биомассы микроводорослей из суспендирующей среды, содержащей биомассу, в котором в суспендирующую среду добавляют коагулянт шестиводный хлорид железа(III) с последующим добавлением полимерного вещества, являющегося флокулянтом на основе полиэтиленоксида, с последующей флокуляцией биомассы, отличающийся тем, что в суспендирующую среду последовательно добавляют шестиводный хлорид железа, полиакриламид, а затем полиэтиленоксид. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что концентрация шестиводного хлорида железа(III) составляет 20-40 мг/л. 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что концентрация полиакриламида составляет 2-5 мг/л. 4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что концентрация полиэтиленоксида составляет 1-4 мг/л. 5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что флокуляцию биомассы проводят при перемешивании при температуре 10°С-40°С. 6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что после добавления шестиводного хлорида железа суспендирующую среду перемешивают 55-65 сек. 7. Способ по п. 5, отличающийся тем, что после добавления полиакриламида суспендирующую среду перемешивают 55-65 сек. 8. Способ по п. 5, отличающийся тем, что после добавления полиэтиленоксида суспендирующую среду перемешивают 30 сек.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при получении гетерогенных биокатализаторов для процессов биокаталитической трансформации органических соединений. Способ получения гетерогенного биокатализатора предусматривает избирательную адсорбцию липазы из Candida antarctica фракции В на гидрофобном макропористом носителе в процессе инкубации частиц носителя в водном концентрате культуральной жидкости штамма дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-4298 с удельной ферментативной активностью не менее 350 ЛЕ/мг белка и последующую ковалентную модификацию адсорбированного фермента глутаровым альдегидом, добавляемым непосредственно в инкубационную суспензию до конечной концентрации его 1,0-2,5%. Процесс инкубации продолжают в течение 30-120 мин. Изобретение позволяет повысить активность и термическую стабильность биокатализатора. Способ получения гетерогенного биокатализатора на основе фермента - липазы дрожжей Candida antarctica фракции В путем адсорбции этого фермента на гидрофобном макропористом носителе в процессе инкубации частиц носителя в водном растворе, содержащем фермент, отличающийся тем, что в качестве водного раствора, содержащего фермент, используют концентрат культуральной жидкости штамма дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-4298 с удельной ферментативной активностью не менее 350 ЛЕ/мг белка, а адсорбированный на носителе фермент по окончании инкубации модифицируют путем добавления глутарового альдегида непосредственно в инкубационную суспензию до конечной его концентрации 1,0?2,5% и продолжают процесс инкубации в тех же условиях в течение 30?120 мин.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии и представляет собой способ получения бактерии Corynebacterium glutamicum или Brevibacterium flavum с повышенным уровнем синтеза L-лизина, включающий высев культуры бактерии Corynebacterium glutamicum или Brevibacterium flavum, способной продуцировать L-лизин, на среду, содержащую фузидиновую кислоту, и отбор среди выросших колоний таких, которые обладают повышенным уровнем синтеза L-лизина. Изобретение относится также к способу микробиологического синтеза L-лизина путем культивирования бактерии, полученной указанным способом. Изобретение позволяет получать L-лизин с высокой степенью эффективности. 1. Способ получения бактерии Corynebacterium glutamicum или Brevibacterium flavum с повышенным уровнем синтеза L-лизина, включающий высев культуры бактерии Corynebacterium glutamicum или Brevibacterium flavum, способной продуцировать L-лизин, на среду, содержащую фузидиновую кислоту, и отбор среди выросших колоний таких, которые обладают повышенным уровнем синтеза L-лизина. 2. Способ микробиологического синтеза L-лизина путем культивирования бактерии, полученной способом по п. 1, в подходящих условиях на минеральной среде, содержащей источники углерода, азота, а также необходимые для роста бактерий аминокислоты и витамины.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и касается вариантов фосфолипазы А2 для экспрессии в дрожжах. Предложен вариант фосфолипазы А2, структурный ген которой кодирует белок, включающий аминокислотную последовательность фосфолипазы А2 штамма А-2688 Streptomyces violaceoruber, содержащую замену С-концевого дипептида FG, состоящего из аминокислотных остатков фенилаланина и глицина, на дипептид YG, состоящий из аминокислотных остатков тирозина и глицина, и содержащую на N-конце дополнительный дипептид SG, состоящий из аминокислотных остатков серина и глицина. Также предложена фосфолипаза А2, структурный ген которой кодирует белок, включающий аминокислотную последовательность фосфолипазы А2 штамма А-2688 Streptomyces violaceoruber или ее вариант, не содержащий сайтов N-гликозилирования, имеющую на N-конце дополнительный дипептид SG, состоящий из аминокислотных остатков серина и глицина, включающую С-концевой дипептид FG, состоящий из аминокислотных остатков фенилаланина и глицина, и дополнительно С-концевой полипептид, имеющий последовательность SEQ ID N:3. Изобретение обеспечивает получение высокоактивных фосфолипаз А2, способных к эффективной экспрессии в дрожжах. 1. Фосфолипаза А2 для экспрессии в дрожжах, структурный ген которой кодирует белок, включающий аминокислотную последовательность фосфолипазы А2 штамма А-2688 Streptomyces violaceoruber, содержащую замену С-концевого дипептида FG, состоящего из аминокислотных остатков фенилаланина и глицина, на дипептид YG, состоящий из аминокислотных остатков тирозина и глицина, и содержащую на N-конце дополнительный дипептид SG, состоящий из аминокислотных остатков серина и глицина. 2. Фосфолипаза А2 для экспрессии в дрожжах, структурный ген которой кодирует белок, включающий аминокислотную последовательность фосфолипазы А2 штамма А-2688 Streptomyces violaceoruber или ее вариант, не содержащий сайтов N-гликозилирования, имеющую на N-конце дополнительный дипептид SG, состоящий из аминокислотных остатков серина и глицина, включающую С-концевой дипептид FG, состоящий из аминокислотных остатков фенилаланина и глицина, и дополнительно С-концевой полипептид, имеющий последовательность SEQ ID N:3.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и генной инженерии, а именно к бактериальному сенсору для детекции изменения pH. Изобретение может быть использовано в медицине для ранней диагностики рака желудка. Сенсорным элементом является бактериальная клетка Helicobacter pylori, содержащая плазмиду pHP, представленную на фиг.1, с бактериальным геном gfp под контролем индуцибельного стрессового промотора PflaA. Предложенное изобретение позволяет быстро и достоверно измерять pH в широком диапазоне. 3 ил., 2 пр.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и генной инженерии и касается способа получения янтарной кислоты с использованием штамма дрожжей, Yarrowia lipolytica ВКПМ Y-3314. Данные дрожжи модифицированы таким образом, что у них снижена активность сукцинатдегидрогеназы. Способ включает стадию выращивания штамма дрожжей в питательной среде, содержащей глицерин, и выделения янтарной кислоты из культуральной жидкости. Использование штамма Yarrowia lipolytica ВКПМ Y-3314 привело к существенному увеличению продукции янтарной кислоты этим способом. 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 5 табл.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к бесконтактным оптическим измерениям скорости, размера и концентрации капель жидкости в нестационарных аэрозольных потоках. Способ определения параметров капель в нестационарных аэрозольных потоках заключается в том, что поток аэрозоля направляют в фокальную плоскость объектива микроскопа, подсвеченную излучением лазера, подсвеченные капли регистрируют видеосистемой микроскопа в виде изображения отдельных треков, где ширину трека определяют размером движущейся капли, излучение маломощного диодного лазера, работающего в импульсно-периодическом режиме, пропускают через цилиндрическую линзу, которая формирует узкий щелевидный в сечении луч света, аэрозольный поток капель направляют в область фокусировки видеомикроскопа, расположенного под определенным углом к излучению маломощного диодного лазера, изображения фокусных точек капель аэрозоля регистрируются цифровым видеомикроскопом, при этом каждая капля, попавшая в область детектирования видеомикроскопа, детектируется на кадрах в виде прерывистого трека из точек, которые соответствуют отдельным импульсам излучения лазера и яркость которых определяется размером движущейся капли. Все кадры с изображениями треков передают на компьютер, где обрабатывают параметры прерывистых треков, определяют яркости точек, интервалы между точками для разных треков, количество зарегистрированных треков в единице объема за единицу времени, вычисляют скорости капель, строят соответствующие гистограммы и определяют распределение по размерам и скоростям, концентрацию капель. Технический результат - возможность одновременного определения размеров капель, их скоростей и концентрации в аэрозольном потоке. 5 ил. Способ определения параметров капель в нестационарных аэрозольных потоках, заключающийся в том, что поток аэрозоля направляют в фокальную плоскость объектива микроскопа, подсвеченную излучением лазера, подсвеченные лазером капли регистрируют видеосистемой микроскопа в виде изображения отдельных треков, где ширину трека определяют размером движущейся капли, отличающийся тем, что излучение маломощного диодного лазера, работающего в импульсно-периодическом режиме, пропускают через цилиндрическую линзу, которая формирует узкий щелевидный в сечении луч света, аэрозольный поток капель направляют в область фокусировки видеомикроскопа, расположенного под определенным углом к излучению маломощного диодного лазера, изображения фокусных точек капель аэрозоля регистрируются цифровым видеомикроскопом, при этом каждая капля, попавшая в область детектирования видеомикроскопа, детектируется на кадрах видеомикроскопа в виде прерывистого трека из точек, которые соответствуют отдельным импульсам излучения лазера и яркость которых определяется размером движущейся капли, все кадры видеомикроскопа с изображениями треков передают на компьютер, на котором при помощи специальной программы обрабатывают параметры прерывистых треков, определяют яркости точек, интервалы между точками для разных треков, количество зарегистрированных треков в единице объема за единицу времени, вычисляют скорости капель, строят соответствующие гистограммы и определяют распределение по размерам и скоростям, концентрацию капель.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)

Изобретение относится к безопасности компьютерных сетей, а именно к формированию изображений при прохождении пользователем полностью автоматизированного теста Тьюринга. Технический результат - повышение вероятности отличить человека от интернет-робота при доступе к интернет-ресурсам. Способ идентификации пользователя компьютера «человек или интернет-робот», в котором каждое изображение формируется на основе группы 3-мерных моделей, при этом параметры освещения и ракурса съемки задаются псевдослучайным процессом, каждая такая 3-мерная модель может синтезироваться из 3-мерных элементарных примитивов путем применения операций объединения, пересечения, дополнения, при этом на изображении демонстрируются более трех объектов и обязательно некоторые имеют сложную форму, и обязательно присутствуют заслонения одних 3-мерных моделей другими, кроме того, объекты отбрасывают тени друг на друга, при этом для каждого тестового задания автоматически создается уникальное изображение. 1. Способ идентификации пользователя компьютера «человек или интернет-робот», включающий этапы: (а) выбирают одну или более 3-мерных моделей из библиотеки 3-мерных моделей, каждая из 3-мерных моделей в библиотеке содержит геометрические данные формы в трех пространственных измерениях, (б) из выбранных на этапе (а) моделей в виртуальном трехмерном пространстве формируют группу моделей, образованную путем их деформации, расположения на сцене, поворот, вариантов освещения и съемки, (в) генерируют по крайней мере одно 2-мерное изображение группы, которую формируют на этапе (б), при этом автоматически генерируют и сохраняют параметры описания изображения, (г) информируют пользователя о последовательности необходимых действий, которые должен осуществить пользователь для подтверждения, что пользователь не является роботом, (д) при выполнении пользователем последовательности ответных действий, о которых его информируют на этапе (г), описывают ответные действия пользователя набором параметров и сохраняют его, (е) выполняют автоматическое сравнение сохраненных параметров ответных действий пользователя с параметрами описания изображения, которые формируют на этапе (в), отличающийся тем, что в состав группы 3-мерных моделей, которую формируют на этапе (а), входит по крайней мере три модели: по крайней мере одна модель, которая имеет выпукло-вогнутую форму, и по крайней мере две модели группы, которые частично заслонены по крайней мере одной моделью группы. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что при выполнении этапа (д) формируют и сохраняют параметры действий пользователя так, что по крайней мере один параметр однозначно связан с числом обнаруживаемых пользователем моделей на изображении, которое генерируют на этапе (в), и этот «пользовательский» параметр на этапе (е) сравнивают с соответствующим автоматически сформированным на этапе (в) параметром описания изображения, который характеризует истинное число моделей на изображении. 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что при выполнении этапа (д) формируют параметры действий пользователя так, что по крайней мере один параметр однозначно связан с отсутствующей по крайней мере одной моделью, на по крайней мере одном изображении, на по крайней мере одной из пар изображений, которые формируют на этапе (в) на основе одной группы моделей, которую формируют на этапе (а). 4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что описывают требуемую последовательность действий пользователя на этапе (г), используя для описания взаимного расположения по крайней мере две модели группы, формируемой на этапе (б), слова из ряда «на», «в», «под», «над», «за», «перед», «у», «при», «между», «напротив», «внутри», «слева от», «справа от», «левее», «правее», «в стороне», «около», «рядом с», «ближе к», «дальше от», «позади», «сзади», «среди», «снаружи». 5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что модели, используемые на этапе (б), синтезируют путем применения операций объединения, пересечения и дополнения из набора отдельных примитивных форм, выбираемых псевдослучайным образом.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)