Изобретения

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен температурочувствительный мутантный PRP8 мини-интеин из Penicillium chrysogenum для нерастворимой экспрессии в клетках Escherichia coli предшественника целевого белка. Мутантный PRP8 мини-интеин содержит замену аминокислотного остатка лейцина в положении 93 на остаток пролина, замену остатка цистеина в положении 1 на остаток аланина и необязательно содержит замену остатка цистеина в положении 11 на остаток тирозина в исходной последовательности PRP8 мини-интеина из Penicillium chrysogenum, состоящей из 157 аминокислотных остатков. При использовании мутантного интеина совмещаются нерастворимая экспрессия и самовыщепление очищенного белка из фьюжна в процессе ренатурации, не требующей использования протеаз. Степень процессинга для модельного целевого белка SUMO составляет более 50%, а для нейротоксина CVIE - около 60%. Температурочувствительный мутантный PRP8 мини-интеин из Penicillium chrysogenum, для нерастворимой экспрессии в клетках Escherichia coli предшественника целевого белка, содержащий замену аминокислотного остатка лейцина в положении 93 на остаток пролина, замену остатка цистеина в положении 1 на остаток аланина и необязательно содержащий замену остатка цистеина в положении 11 на остаток тирозина в исходной последовательности PRP8 мини-интеина из Penicillium chrysogenum, состоящей из 157 аминокислотных остатков.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ выделения липидов для биодизеля из биомассы микроводоросли рода Chlorella. Способ включает гомогенизацию сухой биомассы микроводоросли измельчением, обработку смесью органических растворителей хлороформ-метанол или хлороформ-этанол в соотношении 1:2-2:1. Суспензию биомассы подвергают обработке ультразвуком с частотой 30-50 кГц в течение 5-20 минут и отделяют липиды. Изобретение обеспечивает повышение выхода целевого продукта. 1. Способ выделения липидов из биомассы микроводоросли рода Chlorella, заключающийся в том, что биомассу микроводоросли обрабатывают органическим растворителем и полученные липиды отделяют, при этом указанные операции проводят дважды с последующим объединением целевого продукта, отличающийся тем, что предварительно сухую биомассу микроводоросли с влагосодержанием не более 10% гомогенизируют измельчением, а после первой обработки биомассы органическим растворителем полученную суспензию биомассы обрабатывают ультразвуком. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что обработку ультразвуком проводят с частотой 30-50 кГц в течение 5-20 минут. 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют смесь хлороформ-метанол в соотношении 1:2-2:1. 4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют смесь хлороформ-этанол в соотношении 1:2-2:1.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии. Предлагается питательная среда, содержащая (мг/л): неорганические соединения из группы: аммоний азотнокислый, калий азотнокислый, кальций хлористый, магний сернокислый, калий фосфорнокислый, борная кислота, калий йодистый, а также комплексы марганца (II), цинка(II), молибдена (VI), меди(П), кобальта(П) с оксиэтилидендифосфоновой кислотой (ОЭДФ), комплекс железа (III) с трилоном Б, и органическую составляющую, включающую миоинозит, тиамин гидрохлорид, пиродоксин гидрохлорид, никотинамид, индолилмасляную кислоту, при следующем весовом соотношении компонентов смеси, мг/л: аммоний азотнокислый 825.0, калий азотнокислый 950.0, кальций хлористый 220.0, магний сернокислый 185.0, калий фосфорнокислый 85.0, борную кислоту 6.2, калий йодистый 0.83, комплексы микроэлементов с оксиэтилидендифосфоновой кислотой: железный(III) 24.5- 27.6, марганцевый 26.4-29.3, цинковый 8.2- 9.1, молибденовокислый 0.33-0.37, медный 0.027-0.030, кобальтовый 0.029 -0.032, а также органическую составляющую, включающую миоинозит 0.5, тиамин гидрохлорид 0.5, пиродоксин гидрохлорид 0.5, индолилмасляную кислоту 0.2, сахарозу 15000, агар-агар 6000 и остальное - вода до 1 л. Предлагаемая питательная среда характеризуется высокой эффективностью для размножения вишни ВЦ-13 in vitro на стадии ризогенеза, которая заключается в обеспечении практически количественной степени укоренения растений-регенерантов с образованием коротких прочных корней, которые легко отмываются. Питательная среда для размножения in vitro косточковой культуры ВЦ-13 (вишня) на стадии ризогенеза, содержащая аммоний азотнокислый, калий азотнокислый, кальций хлористый, магний сернокислый, калий фосфорнокислый, борную кислоту, калий йодистый, а также комплексы железа (III), марганца (II), цинка(II), молибдена (VI), меди(II) и кобальта(II) с оксиэтилидендифосфоновой кислотой и органическую составляющую, включающую миоинозит, тиамин гидрохлорид, пиродоксин гидрохлорид, никотинамид, индолилмасляную кислоту, при следующем весовом соотношении компонентов, мг/л: • Аммоний азотнокислый 825.0 • Калий азотнокислый 950.0 • Кальций хлористый 220.0 • Магний сернокислый 185.0 • Калий фосфорнокислый 85.0 • Борная кислота 6.2 • Калий йодистый 0.83 • Комплексы микроэлементов с оксиэтилидендифосфоновой кислотой: • железный(III) 24.5-27.6 • марганцевый 26.4-29.3 • цинковый 8.2-9.1 • молибденовокислый 0.33-0.37 • медный 0.027-0.030 • кобальтовый 0.029-0.032 • Миоинозит, 100.0 • Никотинамид, 0.5 • Тиамин гидрохдорид, 0.5 • Пиродоксин гидрохлорид 0.5 • Индолилмасляная кислота 0.2 • Сахароза 30000 • Агар-агар 6000 • Вода до 1 л

Федеральное государственное унитарное предприятие "Институт химических реактивов и особо чистых химических веществ Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ИРЕА) (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии. Предлагается питательная среда, которая содержит следующие компоненты (мг/л): аммоний азотнокислый 200-360, калий азотнокислый 750-1550, кальций азотнокислый 650-800, магний сернокислый 120-250, калий фосфорнокислый 300-370, борная кислота 6,0-6,4, цинк сернокислый 8,0-9,2, калий йодистый 0,075-0,085, натрий молибденовокислый 0,2-0,3, медь сернокислая 0,02-0,03: кобальт хлористый 0,02-0,03, железный(П) комплекс гидроксиэтилидендифосфоновой кислоты 15,2-60,8, миоинозит 100, тиамин гидрохлорид 0,5, пиродоксин гидрохлорид 0,5, никотинамид 0,5; глицин 1000, 6-бензиламинопурин 0,3, сахароза 30000, агар 6000, остальное вода до 1 л. Питательная среда обеспечивает увеличение коэффициента размножения крыжовника сорта «Розовый-2» в 1,36 - 1,82 раза по сравнению со средой Кворина-Лепуавра, при этом в 1,3-2,0 раза увеличивается и средняя длина побегов. Питательная среда для размножения на стадии пролиферации крыжовника сорта «Розовый-2», содержащая аммоний азотнокислый, калий азотнокислый, магний сернокислый, калий фосфорнокислый, комплексное соединение железа(П), борную кислоту, цинк сернокислый, калий йодистый, натрий молибденовокислый, медь сернокислую, кобальт хлористый, кальций азотнокислый, органическую составляющую и воду, отличающаяся тем, что в качестве комплексного соединения железа(П) питательная среда содержит железный(П) комплекс гидроксиэтилидендифосфоновой кислоты Fe(П)HEDP при следующем весовом соотношении компонентов, мг/л: Аммоний азотнокислый 200-360 Калий азотнокислый 750-1550 Кальций азотнокислый 650-800 Магний сернокислый 120-250 Калий фосфорнокислый 300-370 Борная кислота 6,0-6,4 Цинк сернокислый 8,0-9,2 Калий йодистый 0,075-0,085 Натрий молибденовокислый 0,2-0,3 Медь сернокислая 0,02-0,03 Кобальт хлористый 0,02-0,03 Железный(П) комплекс гидроксиэтилидендифосфоновой кислоты 15,2-60,8 Миоинозит 100 Тиамин гидрохлорид 0,5 Пиридоксин гидрохлорид 0,5 Никотинамид 0,5 Глицин 1000 6-Бензиламинопурин 0,3 Сахароза 30000 Агар 6000 Вода остальное до 1 л

Федеральное государственное унитарное предприятие "Институт химических реактивов и особо чистых химических веществ Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ИРЕА) (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к рекомбинантной продукции белков человека, и может быть использовано для получения гибридного рекомбинантного эритропоэтина человека. Конструируют нуклеотидные последовательности, кодирующие гибридные белки EPO-TR 1,6, EPO-TR 4 и EPO-TR 6. Белок ЕРО-TR 1,6 представляет собой рекомбинантный эритропоэтин человека, слитый с фрагментом TR 1,6 белка MUC1 человека. Белок EPO-TR 4 представляет собой рекомбинантный эритропоэтин человека, слитый с фрагментом TR 4 белка MUC1 человека. Гибридный белок EPO-TR 6 представляет собой рекомбинантный эритропоэтин человека, слитый с фрагментом TR 6 белка MUC1 человека. Гибридные белки получают путем роллерного культивирования в подходящих условиях модифицированной линии клеток млекопитающих СНО, содержащей кодирующую белок нуклеотидную последовательность с последующим выделением гибридного белка из культуральной жидкости. Изобретение позволяет получить гибридный рекомбинантный эритропоэтин человека, обладающий пролонгированным действием. 1. Гибридный белок ЕРО-TR 1,6 на основе рекомбинантного эритропоэтина человека, обладающий пролонгированным действием, соответствующий аминокислотной последовательности SEQ ID NO4 и представляющий собой рекомбинантный эритропоэтин человека, слитый с фрагментом TR 1,6 белка MUC1 человека. 2. Гибридный белок EPO-TR 4 на основе рекомбинантного эритропоэтина человека, обладающий пролонгированным действием, соответствующий аминокислотной последовательности SEQ ID NO5 и представляющий собой рекомбинантный эритропоэтин человека, слитый с фрагментом TR 4 белка MUC1 человека. 3. Гибридный белок EPO-TR 6 на основе рекомбинантного эритропоэтина человека, обладающий пролонгированным действием, соответствующий аминокислотной последовательности SEQ ID NO6 и представляющий собой рекомбинантный эритропоэтин человека, слитый с фрагментом TR 6 белка MUC1 человека. 4. Способ получения гибридного белка по п.п.1 или 2 или 3 путем роллерного культивирования в подходящих условиях модифицированной линии клеток млекопитающих СНО, содержащей кодирующую этот белок нуклеотидную последовательность SEQ ID NO1 или SEQ ID NO2 или SEQ ID NO3 с последующим выделением гибридного белка из культуральной жидкости.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к технологии выращивания фототрофных микроорганизмов. Способ культивирования фототрофных микроорганизмов включает приготовление посевного материала, питательной среды для выбранного вида фототрофного микроорганизма. Последующую подачу атмосферного воздуха в рабочую камеру фотобиореактора. Затем осуществление перемешивания культуральной жидкости перекачиванием помпой и барботированием. При этом заранее подготовленную клеточную суспензию фототрофных микроорганизмов и отражающую пластину из гидрогеля с высоким альбедо помещают в фотобиореактор. Осуществляют поддержание освещенности на уровне 100±5 мкмоль/м2*с в разное время суток автоматически путем изменения электронапряжения на источниках искусственного освещения от 3,6 до 5 В в зависимости от изменения напряжения на фоторезисторах по формуле: https://new.fips.ru/ofpstorage/Doc/IZPM/RUNWC1/000/000/002/732/225/ИЗ-02732225-00001/00000008.jpg Увеличенное изображение (открывается в отдельном окне) где V - напряжение, подаваемое на источники искусственного освещения, В; Е - напряжение на фоторезисторах, В. Изобретение обеспечивает достижение технического результата, заключающегося в повышении энергетической эффективности и снижении энергетических затрат на процесс культивирования за счет обеспечения возможности использования режимов адаптивного освещения и повышения уровня освещенности в культуральной жидкости в фотобиореакторе при использовании отражающей пластины из гидрогедя с высоким альбедо. Способ культивирования фотосинтезирующих микроорганизмов в фотобиореакторе, включающий приготовление посевного материала, питательной среды для выбранного вида фототрофного микроорганизма, подачу атмосферного воздуха в рабочую камеру фотобиореактора, осуществление перемешивания культуральной жидкости перекачиванием помпой и барботированием, отличающийся тем, что заранее подготовленную клеточную суспензию фототрофных микроорганизмов и отражающую пластину из гидрогеля с высоким альбедо помещают в фотобиореактор, поддержание освещенности на уровне 100±5 мкмоль/м2*с в разное время суток осуществляют автоматически путем изменения электронапряжения на источниках искусственного освещения от 3,6 до 5 В в зависимости от изменения напряжения на фоторезисторах по формуле: https://new.fips.ru/ofpstorage/Doc/IZPM/RUNWC1/000/000/002/732/225/ИЗ-02732225-00001/00000007.jpg Увеличенное изображение (открывается в отдельном окне) где V - напряжение, подаваемое на источники искусственного освещения, В; Е - напряжение на фоторезисторах, В.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу определения устойчивости к обезвоживанию винных штаммов дрожжей Saccharomyces cerevisiae и активности протекторных соединений, способствующих сохранению жизнеспособности дрожжевых клеток после обезвоживания, и может быть использовано в пищевой и алкогольной промышленности. Способ включает подготовку тест-организмов, наращивание биомассы на синтетической питательной среде, выдержку на протекторных соединениях, обезвоживание, реактивацию сухих дрожжей, проведение посевов на плотную среду, культивирование и вычисление результатов. Для получения биомассы используют трехсуточную культуру тест-организмов, которую вносят на синтетическую питательную среду и культивируют в течение 48 часов при температуре 23-27°С при перемешивании 200 об/мин. Состав синтетической питательной среды: сахароза 20 г/дм3, сернокислый аммоний 3 г/дм3, сернокислый магний 0,7 г/дм3, азотнокислый кальций 0,4 г/дм3, хлористый натрий 0,5 г/дм3, фосфорнокислый калий однозамещенный 1,0 г/дм3, инозит 5,0 мг/дм3, биотин 0,0001 мг/дм3, пантотеновая кислота 0,25 мг/дм3, тиамин 1,0 мг/дм3, пиридоксин 0,25 мг/дм3, никотиновая кислота 0,5 мг/дм3. Полученную биомассу клеток тест-организмов промывают в стерильной воде, делят на три равные части, при этом первую часть сразу инокулируют на плотную среду, вторую часть направляют на сушку, а в третью часть добавляют протекторные соединения, а затем направляют на сушку. Вторая и третья части обезвоженной биомассы выдерживаются не менее чем 24 часа, а затем реактивируются с последующим инокулированием на плотные питательные среды. Культивирование на плотных питательных средах проводят в течение 3-х суток при температуре 23-27°С, после чего проводят подсчет колониеобразующих единиц и вычисление жизнеспособности дрожжей по формуле. Изобретение обеспечивает возможность оценки устойчивости к обезвоживанию штаммов дрожжей Saccharomyces cerevisiae и активности протекторных соединений в заданных условиях культивирования. Способ определения устойчивости к обезвоживанию винных штаммов дрожжей Saccharomyces cerevisiae и активности протекторных соединений, включающий подготовку тест-организмов, наращивание биомассы, выдержку на протекторных соединениях, обезвоживание, реактивацию сухих дрожжей, посев на плотную питательную среду, культивирование, вычисление результатов, отличающийся тем, что для подготовки тест-организмов используют биомассу трехсуточной культуры дрожжей Saccharomyces cerevisiae, далее наращивание биомассы проводят при культивировании дрожжей в течение 48 часов, а в качестве питательной среды для получения биомассы используют синтетическую питательную среду, содержащую: сахарозу 20 г/дм3, сернокислый аммоний 3 г/дм3, сернокислый магний 0,7 г/дм3, азотнокислый кальций 0,4 г/дм3, хлористый натрий 0,5 г/дм3, фосфорнокислый калий однозамещенный 1,0 г/дм3, инозит 5,0 мг/дм3, биотин 0,0001 мг/дм3, пантотеновую кислоту 0,25 мг/дм3, тиамин 1,0 мг/дм3, пиридоксин 0,25 мг/дм3, никотиновую кислоту 0,5 мг/дм3, после чего полученную биомассу делят на три равные части, при этом первую часть сразу инокулируют на плотную питательную среду YPD, вторую часть направляют на сушку, а в третью часть добавляют протекторные соединения и также направляют на сушку, после чего высушенные вторую и третью части биомассы выдерживают не менее чем 24 часа, а затем реактивируют и инокулируют на плотную питательную среду YPD, проводят раздельное культивирование всех трех частей, после чего ведут подсчет колониеобразующих единиц и вычисление жизнеспособности дрожжей по каждой части отдельно с возможностью одновременной оценки устойчивости к обезвоживанию дрожжей и активности протекторных соединений.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к слитому пептиду, содержащему в своем составе расположенные от N-конца к C-концу самоассоциирующий пептид L6KD, пептид pepA1 и антиген. Изобретение эффективно для получения биосинтетических антиген-презентирующих наночастиц. 6 ил., 2 табл., 24 пр.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Предложен способ диагностики предрасположенности пациента к наследственной макулодистрофии Штаргардта. Фибробласты кожи, взятые у пациента, культивируют и обрабатывают вирусными конструкциями, несущими гены Oct4, Sox2 и Klf4 под контролем CMV промотера. Осуществляют направленную дифференцировку фибробластов в клетки ретины. Из клеток ретины выделяют кодирующую РНК гена АВСА4. По наличию делеции в экзоне 39-41 гена АВСА4 диагностируют предрасположенность пациента к наследственной макулодистрофии Штаргардта. Изобретение позволяет эффективно диагностировать предрасположенность пациента к наследственной макулодистрофии Штаргардта по наличию делеции в экзоне 39-41 гена АВСА4. Способ диагностики предрасположенности пациента к наследственной макулодистрофии Штаргардта, включающий взятие фибробластов кожи у этого пациента, их культивирование и обработку вирусными конструкциями, несущими гены Oct4, Sox2 и Klf4 под контролем CMV промотера, последующее культивирование для направленной дифференцировки фибробластов в клетки ретины и дальнейшее исследование клеток ретины на наличие мутации в экзоне 39-41 гена АВСА4, и по наличию делеции в этом экзоне диагностируют предрасположенность пациента к наследственной макулодистрофии Штаргардта.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины, а именно к созданию высокопористых полимерных частиц, используемых в регенеративной медицине, тканевой инженерии и хирургии, а также в качестве назальных или трансдермальных форм доставки лекарств, или в качестве кровоостанавливающих средств. Для получения пористых полимерных микрочастиц используют лиофильную сушку. Способ включает несколько стадий: на первой готовят полимерный раствор, используя в качестве растворителей воду и разбавленные растворы кислот и щелочей, или буферные водные растворы или 1,4-диоксан, диметилсульфоксид. При этом к навеске полимерного материала с содержанием от 0,5 до 2 масс. % сухого вещества от конечного количества раствора приливают от 98 до 99,5 масс. % растворителя, перемешивают на магнитной мешалке не менее 48 ч при комнатной температуре и скорости от 100 до 300 об/мин. Затем проводят стадию формирования аэрозоля с последующей шоковой заморозкой, включающей залив полимерного раствора или суспензии в резервуар пневматического распылителя с последующим распылением при давлении 3 бар в металлическую емкостью, наполненную жидким азотом на 2/3 объема. После этого основную часть жидкого азота испаряют при комнатной температуре, частицы переносят в предварительно охлажденный до -195°С полипропиленовый стакан и оставляют в морозильной камере при температуре -24°С в течение 24 ч до полного испарения азота. Последней стадией является высушивание замороженной суспензии, включающее удаление растворителя из пор посредством сублимационной сушки с дальнейшей досушкой в сушильном шкафу при комнатной температуре. Предложенное изобретение позволяет получать пористые полимерные микрочастицы с применением лиофильной сушки. 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 9 пр.

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный исследовательский центр «Курчатовский институт» (RU)