Изобретения

Группа изобретений относится к микробиологической промышленности. Предложен способ повышения продукции изолимонной кислоты в условиях избытка источника углерода и лимита по азоту с использованием дрожжей Yarrowia lipolytica, в которых усилен уровень экспрессии гена Y. lipolytica YALI0E34672g, кодирующий митохондриальный транспортер YALI0E34672p, участвующий в экспорте изоцитрата из митохондрии. Предложены также дрожжи вида Yarrowia lipolytica, продуцирующие изолимонную кислоту в условиях избытка источника углерода и лимита по азоту, у которых увеличено число копий гена Y. lipolytica YALI0E34672g и/или усилена промоторная область указанного гена. Группа изобретений обеспечивает повышение продукции изолимонной кислоты у дрожжей Yarrowia lipolytica. 1. Способ повышения продукции изолимонной кислоты у дрожжей Yarrowia lipolytica в условиях избытка источника углерода и лимита по азоту путем повышения уровня экспрессии гена Y. lipolytica YALI0E34672g за счет увеличения числа копий гена и/или замены нативного промотора указанного гена на более сильный промотор. 2. Дрожжи вида Yarrowia lipolytica, продуцирующие изолимонную кислоту в условиях избытка источника углерода и лимита по азоту, отличающиеся тем, что в них увеличено число копий гена Y. lipolytica YALI0E34672g и/или усилена промоторная область указанного гена.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Разработан способ получения в дрожжах Saccharomyces cerevisiae секретируемой полностью функциональной фосфолипазы А2, включающей последовательность фосфолипазы А2 штамма Streptomyces violaceoruber А-2688, в том числе несущей мутации S31A, S82A и N108Q, и содержащей на N-конце дополнительный дипептид, состоящий из аминокислотных остатков серина и глицина. Заявляемый способ включает биосинтез предшественника целевого белка, представляющего собой вариант фосфолипазы А2, содержащей инсерцию интеина между остатком глицина в позиции 75 и остатком серина в позиции 76. Также изобретение включает в себя четыре белка-предшественника, которые кодируются последовательностями SEQ ID N: 1-4 соответственно. Удаление инсерции интеина и превращение белка-предшественника в активный целевой белок происходит путем автокаталитического процессинга. 1. Способ получения секретируемой полностью функциональной фосфолипазы А2, осуществляемый путем получения и введения в клетки дрожжей Saccharomyces cerevisiae генетической конструкции, кодирующей белок-предшественник, включающий последовательность нативной, содержащей сайты N-гликозилирования, или мутантной, не содержащей сайтов N-гликозилирования, фосфолипазы А2 штамма Streptomyces violaceoruber А-2688, содержащей инсерцию интеина между остатком глицина в позиции 75 и остатком серина в позиции 76, а также имеющей на N-конце дополнительный дипептид, состоящий из аминокислотных остатков серина и глицина, с последующим биосинтезом этого белка-предшественника и его автокаталитическим процессингом с образованием целевого продукта. 2. Белок-предшественник для осуществления способа по п. 1, кодируемый последовательностью SEQ ID N: 1 и содержащий инсерцию интеина PRP8 штамма Penicillium chrysogenum ВКПМ F-3 в составе нативной фосфолипазы А2 штамма Streptomyces violaceoruber А-2688. 3. Белок-предшественник для осуществления способа по п. 1, кодируемый последовательностью SEQ ID N: 2 и содержащий инсерцию интеина PRP8 штамма Penicillium chrysogenum ВКПМ F-3, несущего мутацию Cys11Tyr, в составе нативной фосфолипазы А2 штамма Streptomyces violaceoruber А-2688. 4. Белок-предшественник для осуществления способа по п. 1, кодируемый последовательностью SEQ ID N: 3 и содержащий инсерцию интеина PRP8 штамма Neosartorya aurata NRRL 4378 в составе мутантной фосфолипазы А2 штамма Streptomyces violaceoruber А-2688, несущей мутации Ser31Ala, Ser82Ala и Asn108Gln. 5. Белок-предшественник для осуществления способа по п. 1, кодируемый последовательностью SEQ ID N: 4 и содержащий инсерцию интеина PRP8 штамма Penicillium chrysogenum ВКПМ F-3, несущего мутацию Cys11Tyr, в составе фосфолипазы А2 Streptomyces violaceoruber А-2688, несущей мутации Ser31Ala, Ser82Ala и Asn108Gln.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при получении гетерогенных биокатализаторов для процессов биокаталитической трансформации органических соединений. Способ получения гетерогенного биокатализатора предусматривает избирательную адсорбцию липазы из Candida antarctica фракции В на гидрофобном макропористом носителе в процессе инкубации частиц носителя в водном концентрате культуральной жидкости штамма дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-4298 с удельной ферментативной активностью не менее 350 ЛЕ/мг белка и последующую ковалентную модификацию адсорбированного фермента глутаровым альдегидом, добавляемым непосредственно в инкубационную суспензию до конечной концентрации его 1,0-2,5%. Процесс инкубации продолжают в течение 30-120 мин. Изобретение позволяет повысить активность и термическую стабильность биокатализатора. Способ получения гетерогенного биокатализатора на основе фермента - липазы дрожжей Candida antarctica фракции В путем адсорбции этого фермента на гидрофобном макропористом носителе в процессе инкубации частиц носителя в водном растворе, содержащем фермент, отличающийся тем, что в качестве водного раствора, содержащего фермент, используют концентрат культуральной жидкости штамма дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-4298 с удельной ферментативной активностью не менее 350 ЛЕ/мг белка, а адсорбированный на носителе фермент по окончании инкубации модифицируют путем добавления глутарового альдегида непосредственно в инкубационную суспензию до конечной его концентрации 1,0?2,5% и продолжают процесс инкубации в тех же условиях в течение 30?120 мин.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения гетерогенного биокатализатора на основе гидролазы эфиров альфа-аминокислот (AEH) из рекомбинантных бактерий Escherichia coli, несущих ген aehR из Xanthomonas rubrilineans. Для осуществления способа указанные рекомбинантные бактерии культивируют в подходящих условиях, затем разрушают клетки биомассы методом гомогенизации высокого давления для получения гомогената. После чего проводят иммобилизацию содержащейся в гомогенате гидролазы эфиров альфа-аминокислот путем формирования ферментных агрегатов под действием осадителя - сульфата аммония или полиэтиленгликоля - с последующей стадией сшивки этих агрегатов глутаровым альдегидом в присутствии водорастворимого производного аминополисахарида хитозана. Полученные гетерогенные биокатализаторы используют для ферментативного синтеза аминобета-лактамных антибиотиков, например цефалексина, цефпрозила, цефаклора, ампициллина, амоксициллина, путем ацилирования ключевых бета-лактамных соединений соответствующими производными эфира D-аминофенилуксусной кислоты. Настоящее изобретение позволяет получить гетерогенные биокатализаторы с повышенной синтетазной активностью. 1. Способ получения гетерогенного биокатализатора на основе гидролазы эфиров альфа-аминокислот из бактерий, несущих ген aehR из Xanthomonas rubrilineans, включающий получение биомассы штамма бактерий, содержащих ген aehR из Xanthomonas rubrilineans путем культивирования этого штамма в подходящих условиях, разрушения клеток биомассы для получения гомогената с последующей иммобилизацией содержащейся в гомогенате гидролазы эфиров альфа-аминокислот путем формирования ферментных агрегатов под действием осадителя и последующей поперечной сшивки этих агрегатов глутаровым альдегидом, отличающийся тем, что для получения биомассы используют рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli, несущий ген aehR из Xanthomonas rubrilineans; получение гомогената осуществляют путем разрушения клеток полученной биомассы методом гомогенизации высокого давления; формирование ферментных агрегатов непосредственно из полученного гомогената под действием осадителя: сульфата аммония или полиэтиленгликоля, а также последующую поперечную сшивку агрегатов глутаровым альдегидом проводят в присутствии водорастворимого производного аминополисахарида хитозана. 2. Гетерогенный биокатализатор на основе гидролазы эфиров альфа-аминокислот из бактерий, несущих ген aehR из Xanthomonas rubrilineans, полученный способом по п.1 из рекомбинантного штамма бактерий Escherichia coli ВКПМ В-11271. 3. Гетерогенный биокатализатор на основе гидролазы эфиров альфа-аминокислот из бактерий, несущих ген aehR из Xanthomonas rubrilineans, полученный способом по п.1 из рекомбинантного штамма бактерий Escherichia coli ВКПМ В-11246. 4. Способ синтеза аминобета-лактамного антибиотика путем ацилирования ключевого бета-лактамного соединения соответствующим производным эфира D-аминофенилуксусной кислоты, под действием гетерогенного биокатализатора на основе гидролазы эфиров альфа-аминокислот из бактерий, несущих ген aehR Xanthomonas rubrilineans, отличающийся тем, что для осуществления синтеза используют гетерогенный биокатализатор, полученный способом по п.1.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Группа изобретений относится к вариантам способа микробиологического синтеза гибридного белка E7-HSP70. Синтез белка E7(6)-HSP70, E7(11)-HSP70, E7(16)-HSP70 или E7(18)-HSP70 осуществляют путем культивирования соответственно штамма дрожжей Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-3919, штамма дрожжей Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-3853, штамма дрожжей Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-4057 или штамма дрожжей Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-4058 в подходящих условиях на среде, содержащей в качестве источника углерода сахарозу. Процесс культивирования осуществляют в две фазы. Первую фазу осуществляют при температуре 25-26°C и начальной концентрации сахарозы 25-30 г/л. По достижении концентрации сахарозы в среде 15 мг/л проводят вторую фазу процесса культивирования, на которой температуру снижают и поддерживают на уровне не более 23°C, значение pH поддерживают на уровне 5,7-5,9, а концентрацию сахарозы поддерживают путем экспоненциальной подпитки на уровне 15 мг/л. Группа изобретений обеспечивает получение целевого продукта в количестве не менее 550 мг/л и позволяет осуществлять процесс культивирования в течение не более 65 ч. 1. Способ микробиологического синтеза гибридного белка E7(6)-HSP70 путем культивирования дрожжей Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-3919, продуцирующих такой белок, в подходящих условиях на среде, содержащей источник углерода в условиях подпитки, отличающийся тем, что в качестве источника углерода используют сахарозу, а процесс культивирования проводят в две фазы: первую из которых осуществляют при температуре 25-26°С и начальной концентрации сахарозы 25-30 г/л, а по достижении концентрации сахарозы в среде 15 мг/л для проведения второй фазы процесса культивирования температуру снижают и поддерживают на уровне не более 23°С, значение рН поддерживают на уровне 5,7-5,9, а концентрацию сахарозы поддерживают на уровне 15 мг/л путем экспоненциальной подпитки. 2. Способ микробиологического синтеза гибридного белка E7(11)-HSP70 путем культивирования дрожжей Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-3853, продуцирующих такой белок, в подходящих условиях на среде, содержащей источник углерода в условиях подпитки, отличающийся тем, что в качестве источника углерода используют сахарозу, а процесс культивирования проводят в две фазы: первую из которых осуществляют при температуре 25-26°С и начальной концентрации сахарозы 25-30 г/л, а по достижении концентрации сахарозы в среде 15 мг/л для проведения второй фазы процесса культивирования температуру снижают и поддерживают на уровне не более 23°С, значение рН поддерживают на уровне 5,7-5,9, а концентрацию сахарозы поддерживают на уровне 15 мг/л путем экспоненциальной подпитки. 3. Способ микробиологического синтеза гибридного белка E7(16)-HSP70 путем культивирования дрожжей Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-4057, продуцирующих такой белок, в подходящих условиях на среде, содержащей источник углерода в условиях подпитки, отличающийся тем, что в качестве источника углерода используют сахарозу, а процесс культивирования проводят в две фазы: первую из которых осуществляют при температуре 25-26°С и начальной концентрации сахарозы 25-30 г/л, а по достижении концентрации сахарозы в среде 15 мг/л для проведения второй фазы процесса культивирования температуру снижают и поддерживают на уровне не более 23°С, значение рН поддерживают на уровне 5,7-5,9, а концентрацию сахарозы поддерживают на уровне 15 мг/л путем экспоненциальной подпитки. 4. Способ микробиологического синтеза гибридного белка E7(18)-HSP70 путем культивирования дрожжей Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-4058, продуцирующих такой белок, в подходящих условиях на среде, содержащей источник углерода в условиях подпитки, отличающийся тем, что в качестве источника углерода используют сахарозу, а процесс культивирования проводят в две фазы: первую из которых осуществляют при температуре 25-26°С и начальной концентрации сахарозы 25-30 г/л, а по достижении концентрации сахарозы в среде 15 мг/л для проведения второй фазы процесса культивирования температуру снижают и поддерживают на уровне не более 23°С, значение рН поддерживают на уровне 5,7-5,9, а концентрацию сахарозы поддерживают на уровне 15 мг/л путем экспоненциальной подпитки.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к области медицины, в частности молекулярной биологии и онкологии, и касается системы маркеров, представляющую собой группу генов микроРНК: miR-129-2, miR-125b1, miR-137 и miR-375, для диагностики немелкоклеточного рака легкого, включая плоскоклеточный рак и аденокарциному. Выявление метилирования по крайней мере одного маркера из этой системы служит диагностическим признаком. Система маркеров позволяет выявить немелкоклеточный рак легкого на ранних клинических стадиях заболевания с высокой клинической чувствительностью и специфичностью. Система маркеров на основе группы генов микроРНК для диагностики немелкоклеточного рака легкого, включая плоскоклеточный рак и аденокарциному, путем выявления метилирования, по крайней мере, одного маркера из этой группы, отличающаяся тем, что маркерами являются гены: miR-129-2, miR-125b1, miR-137 и miR-375.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены полифункциональный препарат, включающий смесь культуральной жидкости кристаллообразующего штамма Brevibacillus laterosporus ВКПМ В-13186 и целевых добавок, иммобилизованную на гранулах диатомита; и его применение: в качестве фунгицидного средства; в качестве альгицидного средства против сине-зеленых и зеленых микроводорослей; в качестве средства, обладающего ларвицидной активностью против личинок комаров отряда Diptera: Anopheles stephensi, Aedes aegypti и Culex pipiens; в качестве средства с антибактериальной активностью против грамположительных бактерий Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Bacillus cereus, Micrococcus luteus, Rhodococcus rhodochrous и грамотрицательных бактерий Acinetobacter baumannii. Изобретения обеспечивают расширение арсенала полифункциональных биопрепаратов - биологических средств защиты растений. . Полифункциональный биопрепарат с широким спектром антагонистической активности, представляющий собой смесь культуральной жидкости кристаллообразующего штамма Brevibacillus laterosporus ВКПМ В-13186 и целевых добавок, иммобилизованную на гранулах диатомита. 2. Применение биопрепарата по п. 1 в качестве фунгицидного средства для борьбы с фитопатогенными микроскопическими грибами. 3. Применение биопрепарата по п. 1 в качестве альгицидного средства для борьбы с сине-зелеными и зелеными микроводорослями. 4. Применение биопрепарата по п. 1 в качестве средства, обладающего ларвицидной активностью против личинок комаров отряда Diptera: Anopheles stephensi, Aedes aegypti и Culex pipiens. 5. Применение биопрепарата по п. 1 в качестве средства, обладающего антибактериальной активностью против грамположительных бактерий Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Bacillus cereus, Micrococcus luteus, Rhodococcus rhodochrous; и грамотрицательных бактерий Acinetobacter baumannii.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к области биохимии и биотехнологии. Штамм Escherichia coli ВКПМ В-10996 культивируют на питательной среде КС, содержащей, мас.%: пептон 2-4, дрожжевой экстракт 1-2 и вода - остальное в присутствии селективного антибиотика до стационарной фазы роста при температуре от 20 до 30°С. Разводят полученную культуру свежей порцией той же среды в соотношении от 1:1 до 1:3. Одновременно вносят индуктор и продолжают культивировать в течение не менее 4 часов. Проводят очистку синтезированной протеиназы. Это обеспечивает получение ферментативно активной протеиназы Ulp275 - варианта SUMO-протеиназы Ulp1 дрожжей Saccharomyces cerevisiae, которая включает в свой состав каталитический домен протеиназы Ulp1 и содержит на С-конце последовательность из 6 остатков гистидина. 9 пр.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и генной инженерии и касается способа получения янтарной кислоты с использованием штамма дрожжей, Yarrowia lipolytica ВКПМ Y-3314. Данные дрожжи модифицированы таким образом, что у них снижена активность сукцинатдегидрогеназы. Способ включает стадию выращивания штамма дрожжей в питательной среде, содержащей глицерин, и выделения янтарной кислоты из культуральной жидкости. Использование штамма Yarrowia lipolytica ВКПМ Y-3314 привело к существенному увеличению продукции янтарной кислоты этим способом. 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 5 табл.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен трансформант дрожжей Komagataella phaffii, продуцирующий фитазу Cronobacter turicensis. Трансформант содержит ДНК-последовательность гена m-phyCt, кодирующего фитазу Cronobacter turicensis, или один из вариантов такой последовательности, обусловленный вырожденностью генетического кода. Полученная фитаза сохраняет не менее 80% и около 100% активности при воздействии на нее соответственно пепсина или трипсина в течение 1 ч при 37°С и соотношении протеаза/фермент 0,1 по массе. Трансформант дрожжей Komagataella phaffii, продуцирующий фитазу Cronobacter turicensis и содержащий ДНК-последовательность гена m-phyCt, кодирующего фитазу Cronobacter turicensis, или один из вариантов такой последовательности, обусловленный вырожденностью генетического кода.

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)